[发明专利]一种高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于活性化合物提取技术领域，尤其是一种高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法。

背景技术

枸杞多糖（Lycium Barbarum polysaccharide,LBP）是从枸杞子中提取的一种水溶性多糖，是枸杞子的主要功能活性成分，总含量大约占枸杞子重量的3.36%。枸杞多糖分子量范围多在两万以上，均溶于水、难溶于酒精，主要由鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖六种单糖组成，是一种酸性杂多糖。大量药理学研究及临床医学表明枸杞多糖具有降血糖、降血脂、抗炎症、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤等多种生理功能。

多糖活性的研究一直得到学术界的广泛关注，随着多糖研究的深入，其越来越多的生物活性逐渐显现。甘璐等的研究表明，枸杞多糖可以通过激活机体的免疫系统来达到抗肿瘤目的。黄霞等的研究表明枸杞多糖以质量浓度依赖方式抑制肝癌细胞的生长，阻滞细胞在G0/G1期，并诱导细胞凋亡。枸杞多糖可通过调控细胞周期相关蛋白的表达而阻止细胞周期的进行，同时诱导细胞凋亡，最终抑制肝癌细胞的生长。说明枸杞多糖是一种新具有广泛应用前景的诱导细胞凋亡的活性物质。

超滤是一种新型膜分离技术，利用不同的孔径截留不同分子量物质，不仅具有常温操作、无相态变化，可以防止杂菌污染和热敏性物质失活等特点，而且比上述方法更适于工业化生产，可以克服从天然产物中分离提取多糖的工艺复杂，生产周期长，生产成本高等不利于工业化生产和大规模临床应用的缺点。姚瑞祺等用超滤法分离枸杞多糖提取液，得到6种不同分子量的枸杞多糖样品液。超滤能够实现不同分子量枸杞多糖的良好分离，可作为枸杞活性成分开发利用的一种新方法。分子量在5000以下的枸杞多糖占多数，达到74.5%；分子量大于3万的较低，尚不到7%。分子量在3-10万的枸杞多糖抗氧化活性最强，其他5种枸杞多糖也都有一定程度的抗氧化活性；分子量5000以下的枸杞多糖为总多糖的主要功效成分，袁振林通过测定的不同分子量分布的枸杞多糖对S-180肿瘤和路易丝肺癌细胞的影响，发现只有分子量在20KD左右的枸杞多糖对S-180肿瘤和路易丝肺癌有较好的疗效。

超滤法应用于多糖的提取分离，具有比传统工艺分离效率高，避免活性物质失活等优势，已成为活性多糖的重要研究手段。超滤能够实现不同分子量枸杞多糖的分离，可作为枸杞活性成分开发利用的一种新方法。

目前，现有技术主要利用超滤技术来除去杂质、浓缩提取液或采用与色谱分离技术结合的方法分离提取枸杞多糖，柱层析操作复杂，不利于工业或生产。而且，目前虽有公开文献介绍了枸杞多糖的提取、分离和纯化的方法，但是对有目的性的获得单一组分的关注较少。

通过检索，发现多篇与超滤分离枸杞多糖相关的专利公开文献：

1、枸杞多糖提取纯化工艺（CN1263108），采用新鲜枸杞浆果分离除去枸杞籽后，制得枸杞原汁，先用50万分子量膜分离枸杞色素及不溶固形微粒，再用1—10万分子量膜截留溶解枸杞多糖原汁部分,真空冷冻成枸杞多糖粗品，订制Φ45mm和Φ100mm大柱径分离柱对枸杞多糖粗品柱层析，可以g量级以上制备纯枸杞多糖。本工艺采用了先进的膜分离技术和大柱层析技术,提高了枸杞多糖的制备效率和得率,适宜于工业化生产，使枸杞多糖尽快转化为药品，用于医学临床。

2、一种枸杞多糖及其制备方法和应用（CN1389475），公开了一种枸杞多糖,其所含活性多糖成分的组成及比例为:分子量在10万～18万∶1万～8万∶0.3万～0.8万=(4～20%)∶(8～40%)∶(4～20%)。本发明还公开了上述枸杞多糖的制备方法：以中药枸杞为原料，加入8～20倍50～100℃的热水，用高速剪切机剪切10～40分钟，压榨，取压榨出的汁高速离心，离心液用截留分子量为5～10万的超滤膜过滤,超滤液再用截留分子量为3000～10000的超滤膜浓缩，冷冻干燥,即得。本发明枸杞多糖活性成分明确，质量可控，用于治疗因免疫能力低下而引起的疾病疗效可靠，并且几乎无不良反应。

3、一种枸杞多糖提取物及其药用用途（CN101564469），明公开了一种枸杞多糖提取物，其特征在于酸性多糖含量为85％-95％，中性多糖为1％-5％。本发明采用水提醇沉、超滤和离子交换有机结合的方法，提取得到枸杞多糖提取物；药理实验表明，本发明枸杞多糖具有很好的治疗肿瘤的作用。

通过对比，本发明专利申请与上述公开的专利文献存在本质的不同。

发明内容