[发明专利]一种高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法

权利要求书

1.一种高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：提取过程中采用超滤法对枸杞多糖进行分级分离。

2.根据权利要求1所述的高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：所述的采用超滤法对枸杞多糖进行分级分离步骤为：

采用截留分子量为30K的超滤膜对枸杞多糖溶液进行分离，收集滤出液，再以截留分子量为10K的超滤膜对上述滤出液分离，收集截留液；滤出液再用截留分子量为4K的超滤膜分离，收集滤出液。

3.根据权利要求1所述的高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：步骤如下：

⑴枸杞多糖的提取：称取干燥的枸杞子，按枸杞子：乙醇溶液=1：3~6（g：ml）的比例加入质量分数为70%的乙醇，打浆、回流、过滤得滤渣，向滤渣中再按1：2~4（g：ml）加入70%的乙醇，回流、过滤，滤渣再重复上述操作2~4次；收集滤渣，挥去乙醇，按1：3~5（g：ml）加入蒸馏水，沸水浴浸提、过滤、收集滤液，将滤渣重复上述提取，合并滤液，真空浓缩；加无水乙醇至终质量浓度为80%，分离、收集沉淀，挥发去除乙醇，复溶、脱蛋白、真空浓缩，得到枸杞粗多糖；

⑵超滤一：将枸杞粗多糖配制成浓度为1.0mg/mL枸杞多糖溶液，选用截留分子量为30K的中空纤维超滤膜，在压力为0.08MPa，室温下超滤至多糖溶液体积变为原来的1/2时，以蒸馏水将其体积补足至原体积，继续超滤，重复上次操作7~11次，收集滤出液备用；

⑶超滤二：取步骤⑵中滤出液，调整其浓度为1.0mg/mL，选用截留分子量为10K的中空纤维超滤膜，在压力为0.003MPa，室温下超滤至多糖溶液体积变为原来的1/2时，以蒸馏水将其体积补足至原体积，继续超滤，重复上次操作4~6次，收集截留液，得截留液1；滤出液备用；

⑷超滤三：取步骤⑶中滤出液，调整其浓度为1.0mg/mL，选用截留分子量为4K的中空纤维超滤膜，在压力为0.08MPa，室温下超滤至多糖溶液体积变为原来的1/2时，以蒸馏水将其体积补足至原体积，继续超滤，重复上次操作4~6次，收集滤出液，得滤出液1；

⑸将截留液1和滤出液1分别经真空浓缩，冷冻干燥，即为高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖。

4.根据权利要求3所述的高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：所述⑴中分离为3000r/min离心15min，或者过滤分离。

5.根据权利要求3所述的高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：所述⑴中回流条件为70℃水浴回流0.5h。

6.根据权利要求3所述的高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：所述⑴中脱蛋白采用聚酰胺色谱柱法或savag法。

7.根据权利要求6所述的高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：所述聚酰胺色谱柱法的具体步骤如下：

将枸杞粗多糖溶解，质量浓度为1%-2%，加入聚酰胺色谱柱，上样量为柱容量的15%-20%，以水洗脱，收集洗脱液，浓缩至可溶性固形物浓度达到5%以上。

8.根据权利要求6所述的高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：所述savag法的具体步骤如下：

取枸杞粗多糖，加水至完全溶解，再依次加入氯仿和正丁醇，枸杞多糖溶液：氯仿：正丁醇的体积比为25：5：1，剧烈振摇20min静置分层，倾出上清液，弃去下层有机溶液和中间变性蛋白质层，上清液重复操作数次，直至无变性蛋白质出现为止，收集上清液，真空浓缩至可溶性固形物浓度达到5%以上。

9.根据权利要求1至8任一项所述的高细胞凋亡诱导活性枸杞多糖的提取方法，其特征在于：所获得的枸杞多糖对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制率达55%以上。