[发明专利]一种牛精液冷冻稀释液及其配制方法

说明书

技术领域

本发明涉及牛冷冻精液生产技术领域，尤其是一种牛冻精稀释液及其配制方法，属于生物技术领域。

背景技术

牛精液冷冻保存与人工受精技术的结合在现代养牛生产中发挥着极其重要的作用，应用冷冻精液进行人工受精可以不受时间、地域、牛品种及个体的限制，并且大量减少公牛的饲养数量，降低生产成本，提高优良种公牛的利用率，为养牛业带来巨大的经济效益。同时，牛精液冷冻技术的发展和牛冷冻精液的使用在牛品种引进、杂交改良，以及提高繁殖性能、疾病控制及牛遗传多样性保护方面具有重要的意义。

精液冷冻稀释液是畜禽精液冷冻保存能否成功的前提条件，只有深入了解稀释液中各成分的用途与作用机理，才能使其发挥有效作用。稀释液的作用主要可以补充精子的营养，减少精液黏稠度，降低异物对精子的影响，同时缓和代谢产物的危害作用，另外还能够保护精子，增强其抵抗低温打击和搞氧化的能力，减少冷冻所造成的损伤。

精液冷冻稀释液通常选用葡萄糖、柠檬酸钠、卵黄、甘油、抗生素等作为主要成分，但是，随着对牛精液冷冻保存技术研究的不断深入，如何能根据品种进行精液特殊的理化性质，将众多成分组合起来，按其合理的比例配制有效的精液冷冻稀释液，仍是今后牛精液冷冻保存工作中的一个重要问题。虽然在牛精液冷冻方面已有一套成熟的技术，还需进一步探索，使新的精液冷冻稀释液能进一步提高解冻精子的质量，提高解冻精液的受精能力。

发明内容

针对目前牛精液冷冻后含菌数较多、冻后活力较低、抗菌效果不太理想的缺陷，本发明的目的在于提供一种能够有效降低牛精液冷冻后含菌数量，抗菌效果好，可大大提高牛冻精生产效率及冻精品质的牛精液冷冻稀释液，另一个发明目的在于提供操作简单、经济实用的该种牛精液冷冻稀释液的制备方法。

本发明公开了一种牛冻精稀释液，其特征在于所述牛冻精稀释液包括A液和B液，其中A液为每100ml稀释液中各原料的含量主要包括：

柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.5～3.4g,庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml，余量为蒸馏水；

其中B液为取自体积比84%～88%的 A液作为基础液，在其中加入12～16ml的甘油或乙二醇构成。

所述A液中每100ml稀释液中各原料的含量最佳值为：

柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.9g、庆大霉素0.16g、环丙沙星0.04g、氨苄西林钠为8万单位、链霉素为5万单位、果糖1.1g、卵黄12ml，余量为蒸馏水。

其中B液为最好是取自体积比85%的 A液作为基础液，在其中加入15ml的甘油或乙二醇配制而成，即其中的主要原料含量最佳值包括：

柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.465g、庆大霉素0.136g、环丙沙星0.34g、氨苄西林钠为6.8万单位、链霉素为4.25万单位、果糖0.935g、卵黄10.2ml、甘油或乙二醇为15ml，余量为蒸馏水。

所述的牛冻精稀释液的配制方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）称取各种原料柠檬酸三钠或柠檬酸钠2.5～3.4g,庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml，甘油或乙二醇为12～16ml及蒸馏水备用；

（2）每100ml蒸馏水用2.5～3.4g的柠檬酸三钠或柠檬酸钠配制成溶液为基础液，配制时溶解定容消毒、过滤；

（3）A液的配制：在上述基础液中加入庆大霉素0.1～0.2g、环丙沙星0.03～0.1g、氨苄西林钠和链霉素各5～10万单位、果糖1～2g、卵黄10～15ml配制而成；

（4）B液的配制：以上述备用的取自体积比84%～88%的A液作为基础液，加入甘油或乙二醇12～16ml配制而成；

上述（3）（4）步骤所获得的A液和B液为所要得到的牛冻精稀释液。

上述牛冻精稀释液在实际操作使用当中，使用的是二次稀释法，即鲜精接入后先置于一定温度的水浴锅内，经过记录、计算得出所需添加稀释A、B液的量后，首先添加等温的A液，然后直接置于常温（22-25℃）水浴中降温30-60min后，添加B液，最后连同水浴（22-25℃）放入4℃低温操作柜内降温平衡4小时，封装打印。

附图1为利用传统牛冻精稀释液与利用本发明所提供的牛冻精稀释液所做的实验对比数据，表中所示利用改进前传统的稀释液所做实验组为ⅰ，利用改进后本发明所提供的稀释液所做实验组ⅱ。国标中冻后活力≥0.35或35%，菌落数≤800个/剂。