[发明专利]FVIII的位点定向修饰

权利要求书

1.由下述组成的缀合物：

(1)由突变的因子VIII氨基酸序列组成的因子VIII多肽，其中SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4的氨基酸序列进行突变，从而在因子VIII氨基酸位置81、377、378、468、504、556、570、1795、1796、1803、1810、1864、1911、2091、2118或2284之一处的非半胱氨酸残基被半胱氨酸残基替代，从而存在突变半胱氨酸残基，其中因子VIII氨基酸位置基于SEQ ID NO：4的成熟的全长人因子VIII氨基酸序列；和

(2)聚乙二醇，

其中因子VIII多肽在突变半胱氨酸残基共价连接到聚乙二醇。

2.权利要求1的缀合物，其中所述聚乙二醇共价连接在多肽的因子VIII氨基酸位置377、378、468、504、556、1795、1796、1803、1810、1864、1911或2284的突变半胱氨酸残基，所述因子VIII氨基酸位置基于SEQ ID NO：4的成熟的全长人因子VIII氨基酸序列，且其中：

(1)缀合物与低密度脂蛋白受体相关蛋白的结合小于未缀合的多肽与低密度脂蛋白受体相关蛋白的结合；

(2)缀合物与低密度脂蛋白受体的结合小于未缀合的多肽与低密度脂蛋白受体的结合；或

(3)缀合物与低密度脂蛋白受体相关蛋白和低密度脂蛋白受体的结合小于未缀合的多肽与低密度脂蛋白受体相关蛋白和低密度脂蛋白受体的结合。

3.权利要求1的缀合物，其中所述聚乙二醇共价连接在多肽的因子VIII氨基酸位置377、378、468、504或556之一处的突变半胱氨酸残基，所述因子VIII氨基酸位置基于SEQ ID NO：4的成熟的全长人因子VIII氨基酸序列，且另外其中所述缀合物与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合小于未缀合的多肽与硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的结合。

4.权利要求1的缀合物，其中所述聚乙二醇共价连接在多肽的因子VIII氨基酸位置81、377、378、468、504、556、570、1795、1796、1803、1810、1864、1911、2091、2118或2284之一处的突变半胱氨酸残基，所述因子VIII氨基酸位置基于SEQ ID NO：4的成熟的全长人因子VIII氨基酸序列，且所述缀合物具有比未缀合的多肽更小的与因子VIII抑制性抗体的结合。

5.权利要求1的缀合物，其中所述聚乙二醇共价连接在多肽的因子VIII氨基酸位置81、377、378、468、504、556、570、1795、1796、1803、1810、1864、1911、2091、2118或2284之一处的突变半胱氨酸残基，所述因子VIII氨基酸位置基于SEQ ID NO：4的成熟的全长人因子VIII氨基酸序列，且该缀合物具有比未缀合的多肽更少的来自能降解因子VIII的血浆蛋白酶的降解。

6.权利要求5的缀合物，其中所述血浆蛋白酶是激活的C蛋白。

7.权利要求1的缀合物，其中所述突变的因子VIII氨基酸序列是突变的SEQ ID NO：3的氨基酸序列。

8.权利要求1-7中任一项的缀合物，其中所述聚乙二醇是甲氧基聚乙二醇。

9.权利要求8的缀合物，其中所述甲氧基聚乙二醇的大小范围为3kD-100kD。

10.权利要求9的缀合物，其中所述甲氧基聚乙二醇的大小范围为5kD-64kD。

11.用于肠胃外施用的药物组合物，其包含治疗有效量的权利要求1-7中任一项的缀合物和可药用佐剂。

12.权利要求1-7中任一项的缀合物在制备治疗血友病的药物中的用途。