[发明专利]一种低聚果糖菊粉纯度的鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种通过HPLC法分析确定酶解前菊粉和酶解后菊粉的果糖和葡萄糖含量差异，并计算出菊粉真实纯度。

背景技术

菊粉( Inulin) 属于线型菊糖型果聚糖，作为一种天然的功能性多糖，具有水溶性膳食纤维和生物活性前提的生理功能，具有超强的增殖双歧杆菌的功能，对于调节机体平衡、恢复胃肠功能、提高免疫力、促进矿物质钙、镁、锌、铜等的吸收、调节血糖、降低血脂、预防肥胖症以及抗癌等生理作用，预防各种疾病、维护身体健康有着极为重要的作用，可广泛用于低热量、低糖、低脂食品中。据文献报导直链结构的果聚糖的纯度在70％以上菊粉在防治高尿酸血症的药物及保健品中也具广泛前途。

菊粉已被世界上多个国家批准作为食品的营养增补剂。日本厚生省批准菊粉为特定保健食品，应用于多种食品中。美国食品和药物管理局批准菊粉为公认的安全级食品配料。欧洲则把它作为控制胆固醇水平的功能性甜味剂广泛应用。我国菊粉的生产也已广泛应用在食品工业。

美国药典等对菊粉的质量控制有许多项，包括溶液澄清度、比旋度、含量、干燥失重、炽灼残渣、硫酸盐、氯化物、重金属等理化检测项目，这些检测项目基本反映了菊粉的特性，可以判断产品是否合格，然而美国药典中含量检测方法中相关试剂不易获得，操作过程繁琐，重现性差。而菊粉含量是反映产品纯度的一个重要指标，对保健功效直接有影响。

目前菊粉常用的测定方法为苯酚-硫酸法，苯酚-硫酸法测定结果为样品总糖含量，菊粉含量等于总糖含量减去还原糖含量所得，无法识别其中的蔗糖、葡聚糖和葡萄糖，即测定结果中菊粉含量有误。国内文献报道菊粉的定量分析方法为高效液相色谱法( High Performance Liquid Chromatography ,HPLC)。用HPLC 法, 以菊粉多糖的某一单体成分作为标准品测定菊粉含量的方法比较复杂, 因为国内菊粉的单体成分不易获得，因此目前的常规分析方法硫酸-苯酚法不能正确检测出产品的纯度。

发明内容

本发明的目的是提供一种低聚果糖菊粉纯度的鉴定方法，通过将菊粉用菊粉酶酶解，然后用HPLC 分析其酶解前后果糖和葡萄糖的变化，由此计算菊粉的纯度，最终准确鉴定出菊粉真实纯度，并由此判断产品是否合格，比现在传统的方法更加科学，更加合理。

本发明是这样实现的：一种低聚果糖菊粉纯度的鉴定方法，其特征在于：通过将菊粉用菊粉酶酶解，然后用HPLC法确定低聚果糖菊粉酶解前、酶解后样品中果糖和葡萄糖的含量，分别计算果糖和葡萄糖酶解前后含量差异，果糖酶解前后百分比差值与葡萄糖酶解前后百分比差值之和乘以0.9，折算成菊粉的纯度；具体包括下述步骤：

    1）、配制果糖、葡萄糖对照品溶液：配制成浓度为10mg/ml的果糖对照品溶液，和浓度为1mg/ml的葡萄糖对照品溶液； 

2）、 色谱条件的设定：检测器：示差折光检测器  检测器温度50℃；

色谱柱：Phenomenex  Rezex  Ca²⁺ ；柱温：80℃；流动相：纯化水；流速：0.50ml/min；进样量：25μ1；运行时间：30~40min； 

3）、菊粉样品处理：供试品（1）：精密称取菊粉样品1.0g置100ml容量瓶中，加入适量水，加热溶解，冷却至温室，用定容至刻度； 

供试品（2）：向浓度为5～30%的菊粉溶液，按每克菊粉加入菊粉酶1～30U混合，在40～70℃水浴中酶解1～36小时；

4）、HPLC分析计算果糖和葡萄糖的含量： 按色谱条件供试品（1）进样，得到菊粉酶解前果糖、葡萄糖的峰面积，参照对照品的面积，计算菊粉中的果糖、葡萄糖含量；按色谱条件供试品（2）进样，得到菊粉酶解后果糖、葡萄糖的峰面积，参照对照品的面积，计算菊粉中的果糖、葡萄糖含量；

5）、菊粉纯度的鉴别：供试品（2）酶解后样品的果糖和葡萄糖含量减去供试品（1）样品的果糖和葡萄糖含量，再乘以0.9，从而确定菊粉样品的纯度；观察其是否符合正常范围，由此判断供试品菊粉纯度是否合格；所述0.9为菊粉中脱水果糖或脱水葡萄糖与果糖或葡萄糖的分子量的比率。

本发明所述的菊粉酶为：菊粉外切酶 、菊粉内切酶、菊粉混合酶其中的一种或两种、三种的混合物。

本发明通过将菊粉用菊粉酶酶解，然后用HPLC 分析其酶解前后果糖和葡萄糖的变化，由此计算菊粉的纯度，最终准确鉴定出菊粉真实纯度，并由此判断产品是否合格，比现在传统的方法更加科学，更加合理。

附图说明