[发明专利]一种增强间充质干细胞免疫抑制功能的方法

说明书

技术领域    

本发明涉及细胞治疗技术领域间充质干细胞技术领域，特别涉及一种增强间充质干细胞免疫抑制功能的方法。

背景技术   

间充质干细胞（Mesenchymal stem cell，MSC）是中胚层起源的，能够进行自我更新，并具备向成骨、软骨和脂肪细胞分化潜能的一种成体干细胞。因为MSC易于分离培养，增殖能力强，免疫原性较低，且来源广泛不存在伦理学问题，这使其在细胞治疗方面的应用具备了其他干细胞所没有的优势。MSC不仅具有低免疫原性，还具有调节免疫功能的作用。MSC不仅可以通过抑制树突状细胞的成熟和抑制T淋巴细胞，B淋巴细胞以及NK细胞的免疫功能抑制免疫反应，还能分泌多种因子调节免疫系统形成免疫抑制。间充质干细胞的免疫抑制功能使间充质干细胞成为一种良好的生物免疫抑制剂，可以用于器官移植抗排斥反应和自身免疫病如类风湿性关节炎、红斑狼疮、硬皮病、膜肾球肾炎、炎性肠病和自身免疫性溶血贫血等。但间充质干细胞的免疫抑制疗法需要较大的细胞量才能起到作用，回输大剂量的间充质干细胞可能会产生急性肺栓塞，肝栓塞，肾栓塞，发热，皮疹等副作用，因此如果能提高单个细胞的免疫抑制能力，在较少细胞量的情况下，间充质干细胞就能起到充分的免疫抑制作用，在提高细胞治疗效力，减少不良副反应，降低治疗成本等方面具有重要意义。

发明内容   

为了解决以上间充质干细胞的免疫抑制能力较低、需要较大的细胞量才能起作用的问题，本发明提供了一种通过MSC免疫调节过程中的关键蛋白的上调来增强间充质干细胞免疫抑制功能的方法。

本发明是通过以下方式实现的：

一种增强间充质干细胞免疫抑制功能的方法，将分离的间充质干细胞传代培养，用含有培养因子的培养基培养至细胞70%汇合，再更换溶有IFN-γ、IL-1β和黄体酮的培养基培养。

所述的方法，优选溶有IFN-γ、IL-1β和黄体酮的培养基中含有1-600ng/mL的IFN-γ、1-200ng/mL的IL-1β和1-100μg/mL的黄体酮。

所述的方法，优选溶有IFN-γ、IL-1β和黄体酮的培养基中含有50ng/mL的IFN-γ、20ng/mL的IL-1β和10μg/mL的黄体酮。

所述的方法，优选含有培养因子的培养基中含有EGF 1-50ng/mL、FGF 1-50ng/mL、VEGF 1-50ng/mL和PDGF 1-50ng/mL。

所述的方法，优选含有培养因子的培养基中含有EGF 2ng/mL、FGF 2ng/mL、VEGF 2ng/mL和PDGF 2ng/mL。

所述的方法，优选含有培养因子的培养基和溶有IFN-γ、IL-1β和黄体酮的培养基中均含10%（体积比）的胎牛血清和2mM/mL的谷氨酰胺。

所述的方法，优选含有培养因子的培养基和溶有IFN-γ、IL-1β和黄体酮的培养基的基础培养基均为DMEM/F12。

所述的方法，优选取传代2-5代的间充质干细胞，培养24-48小时，使其达到70%汇合。

所述的方法，优选间充质干细胞在溶有IFN-γ、IL-1β和黄体酮的培养基中培养2-5天后，弃培养基，收获免疫抑制功能增强的间充质干细胞。

所述的方法，优选所述间充质干细胞为人类新生儿脐带间充质干细胞。

通过一些细胞因子和生物分子来刺激MSC细胞表面受体，通过分子通路激活内源基因，上调细胞免疫抑制蛋白的表达和免疫抑制活性物质的分泌，能达到增强MSC免疫抑制功能的效果。γ干扰素（IFN-γ）、白介素1β（IL-1β）和黄体酮不仅能增强MSC对T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞的接触抑制，还可以激活MSC内源基因，增加细胞释放的免疫抑制活性物质。细胞因子激活是在不影响MSC细胞内在基因构成，保证生物安全性的基础上提高MSC免疫抑制功能的最好方法。IFN-γ、IL-1β和黄体酮三种因子联合激活MSC细胞，对于活化不同位置的内源基因，促进多种不同免疫抑制蛋白的分泌起到了强化高效的协同诱导作用。