[发明专利]通过人血清乳铁蛋白免疫复合物辅助诊断类风湿关节炎试剂盒

说明书

技术领域

本发明是一种通过血清中乳铁蛋白免疫复合物含量辅助诊断自身免疫性疾病的试剂盒。本发明辅助诊断类风湿性关节炎的ELISA试剂盒，用小鼠抗人乳铁蛋白单克隆抗体作为包被抗体，用抗人IgM与IgG抗体作为检测抗体，夹心ELISA的方式检测出人血清中乳铁蛋白免疫复合物含量。通过该试剂盒可以用于辅助诊断类风湿性关节炎，具有重要的应用价值。 

背景技术

新生儿在出生后的一段时间内免疫系统没有发育完全，容易被各种病原微生物所侵害，这时需要来自母亲转移来的抵抗力帮助机体防御。这种可转移的抵抗力来源有两种，一种母亲的IgG通过胎盘进入胎儿的血液中，出生后仍能保持一段时间；另一种是通过母乳里的杀伤或是抑制病原微生物活性物质，对婴儿起到保护作用。母乳里抗菌活性物质中除了IgA，溶菌酶外，一个重要的分子为乳铁蛋白。1960年Groves首先从牛的乳汁中纯化出一种能与铁结合的“红蛋白”；随后由于其转运铁的特性及来源，被命名为乳转铁蛋白(lactotransferrin)或乳铁蛋白(lactoferrin，Lf)。 

乳铁蛋白是一个非血红素铁结合蛋白，是转铁蛋白家族的一部分，与血清转铁蛋白，卵转铁蛋白，黑素转运铁蛋白和碳酸酐酶抑制因子共同组成转铁蛋白家族，其功能是在血清中运输铁。乳铁蛋白拥有强大的铁结合亲和力，这是在极端PH值范围内唯一保持铁的转运能力的蛋白，包括极酸性pH值。它也表现出更大的蛋白质降解阻力。 

乳铁蛋白的这些特性使它成为一个具有多种生物学功能的蛋白质，除了提高机体对铁离子的吸收外等生理功能外，还具有抗菌，抗病毒，抗真菌，抗寄生虫，抗肿瘤等功能；近些年来，还发现乳铁蛋白能与免疫细胞结合，发挥重要的免疫调节作用。 

乳铁蛋白在人体中广泛表达，进入大多数分泌液中，包括乳汁，唾液，泪液，鼻腔和支气管分泌物，胃肠液，胆汁，精液。乳铁蛋白含量最高的是乳汁，由乳腺细胞合成，成熟母乳和初乳的浓度中的乳铁蛋白浓度为1-7g/L。同时，乳铁蛋白也是嗜中性粒细胞次颗粒的主要成分，为血液中乳铁蛋白的主要来源。在炎症和一些病理情况下中，乳铁蛋白被嗜中性粒细胞次颗粒大量释放；在正常情况下血浆中乳铁蛋白浓度甚微，在正常情况下血浆中乳铁蛋白浓度约为0.4-2mg/L，但在败血症中能增加到200mg/L。 

类风湿关节炎是一种常见的自身免疫性疾病，其病理特点为慢性进行性关节滑膜和关节 软骨破坏，有较高的致残率。类风湿关节炎患者体内存在多种抗自身抗体及免疫复合物，如类风湿因子(RF)，抗核抗体(ANA)，抗角蛋白抗体(AKA)，抗磷脂抗体(APL)及抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)等。其中RF与抗体所形成的免疫复合物在疾病的发展过程中起较重要的作用。同时又可以作为诊断类风湿关节炎并评价其活动性的重要指标。而抗乳铁蛋白抗体属于ANCA的一种，在部分RA患者血清中呈高表达，但是单用抗乳铁蛋白抗体作为诊断指标，敏感性与特异性却并不太高。此外类风湿关节炎活动期，存在于嗜中性粒细胞次级颗粒的乳铁蛋白被大量释放，使其局部浓度由6μg/ml骤升至200μg/ml。但是乳铁蛋白升高主要是在关节液中，而血液中升高并不明显，作为诊断标准并不理想。 

但是，由于乳铁蛋白与其抗体均在血清中高表达，其形成的免疫复合物会产生明显变化。免疫复合物又称为抗原抗体复合物，在固有免疫应答与适应性免疫应答中都起到重要作用。免疫复合物通过抗体的Fc段与免疫细胞上的Fc受体分子相结合，启动下游激活或是抑制信号，介导ADCC以及巨噬细胞对免疫复合物的捕获与清除。同时，免疫复合物激活补体系统，从而介导细胞对细菌的杀伤作用。因此乳铁蛋白免疫复合物在类风湿关节炎中发挥重要的作用，而且可以成为一个良好的辅助诊断指标。 

经查，未发现通过人血清乳铁蛋白免疫复合物辅助诊断类风湿关节炎的报道。 

发明内容

本发明的目的主要在于通过ELISA方法检测出血清中乳铁蛋白免疫复合物的含量，从而作为类风湿关节炎的辅助诊断。 

该方法具体如下：用抗人乳铁蛋白免疫复合物单克隆抗体作为包被抗体，封闭后，加入待测血清，然后用HRP标记的抗人IgM或抗人IgG作为检测抗体，用邻苯二胺显色。从而检测出乳铁蛋白免疫复合物的含量。