[发明专利]抗肿瘤基因工程二价类抗体及其制备方法及抗肿瘤基因工程药物

权利要求书

1. 一种抗肿瘤基因工程二价类抗体，包括两个可变区和将所述两个可变区连接在一起的恒定区，其特征在于，所述两个可变区分别为SIRPα和B7；所述恒定区为柔性连接肽、或者所述恒定区为人抗体的恒定区。

2. 根据权利要求1所述的抗肿瘤基因工程二价类抗体，其特征在于，所述柔性连接肽具有序列表中的SEQ ID No:16所示的氨基酸序列，所述人抗体的恒定区为具有激活人体免疫功能的抗体Fc片段。

3. 根据权利要求1或2所述的抗肿瘤基因工程二价类抗体，其特征在于，所述人抗体的恒定区为IgG抗体的恒定区、IgA抗体的恒定区或IgM抗体的恒定区。

4. 根据权利要求1或2所述的抗肿瘤基因工程二价类抗体，其特征在于，所述SIRPα和所述B7分别通过所述柔性连接肽与所述人抗体的恒定区柔性连接，所述柔性连接肽具有序列表中的SEQ ID No:16所示的氨基酸序列。

5. 一种权利要求1或2中抗肿瘤基因工程二价类抗体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

A：分别获取恒定区基因、SIRPα基因和B7基因；

B：当所述恒定区基因为人抗体的恒定区基因时，采用真核表达载体构建包括人抗体的恒定区基因、SIRPα基因和B7基因的表达质粒；

或者，当所述恒定区基因为柔性连接序列时，采用原核表达载体或所述真核表达载体构建包含柔性连接序列、SIRPα基因和B7基因的表达质粒；

C：将步骤B中形成的表达质粒转染至表达细胞株中进行培养，稳定表达二价类抗体；以及

D：离心收集上清或细胞进行纯化后得到所述二价类抗体。

6. 根据权利要求5所述的抗肿瘤基因工程二价类抗体的制备方法，其特征在于，在步骤B中，所述人抗体的恒定区基因为IgG抗体的恒定区基因、IgA抗体的恒定区基因或IgM抗体的恒定区基因；所述柔性连接序列具有以下核苷酸序列：GAA TGT TCC。

7. 根据权利要求5所述的抗肿瘤基因工程二价类抗体的制备方法，其特征在于，在步骤B中，所述真核表达载体为pCDNA3.1/His C、pCDNA5/FRT/TO TOPO TA、pEGFP-N1或pBudce4.1；所述原核表达载体为pET28a、pGEX-4T-1或pTrxA。

8. 根据权利要求5所述的抗肿瘤基因工程二价类抗体的制备方法，其特征在于，在步骤C中，所述表达细胞株为293细胞、293T细胞或中国仓鼠卵巢细胞。

9.一种抗肿瘤基因工程药物，其特征在于，所述抗肿瘤基因工程药物含有权利要求1或2中的抗肿瘤基因工程二价类抗体。