[发明专利]镍-双缩脲试剂盒的制备方法、产品及应用方法

权利要求书

1.一种镍-双缩脲试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）制备A组试剂：将1.0~1.4 mol/L氢氧化钠用0.14~0.2mol/L氯化钠溶液溶解得A组试剂；

2）制备B组试剂：将0.05~0.07mol/L三乙醇胺、0.17~0.23mol/L柠檬酸三钠、0.015~0.025 mol/L六水合硫酸镍分别用0.14~0.2mol/L 氯化钠溶液进行溶解，然后将溶解后的三乙醇胺、柠檬酸三钠、六水合硫酸镍以3:（4~5）：（2~3）的体积比先将溶解后的三乙醇胺慢慢加入溶解后的柠檬酸三钠混合，然后再加入溶解后的六水合硫酸镍混合得B组试剂；

3）将A组试剂、B组试剂分别保存，使用时将A组试剂与B组试剂以4:1~6:1体积比的比例混合，得镍-双缩脲试剂。

2.根据权利要求1所述的镍-双缩脲试剂盒的制备方法，其特征在于：步骤2中所述三乙醇胺为0.06mol/L。

3.根据权利要求1所述的镍-双缩脲试剂盒的制备方法，其特征在于：所述步骤1、步骤2中所述氯化钠溶液分别为0.154 mol/L。

4.一种如权利要求 1 所述的镍-双缩脲试剂的制备方法所制得的产品。

5.一种如权利要求 1 所述的镍-双缩脲试剂盒的制备方法所制得产品的应用方法，其特征在于：包括如下步骤：

a）在浓度为0~8000mg/L的范围内，用3~7个不同浓度定标液测定总蛋白，得出定标曲线； 

b）测定被测样本总蛋白含量：在以下两种方式中选择一种：方式一：手工比色法：取所述A组试剂1.8~2.8ml与B组试剂0.3~0.7ml混合，然后加入0.25~0.35ml被测样本混合后，放置30℃~40℃水浴2~4小时或避光室温16~48小时；用分光光度仪测定吸光值，并用空白镍-双缩脲试剂校零，最终测得的结果与步骤a中所述定标液的定标曲线进行对照，根据定标曲线得出被测样本总蛋白含量；方式二：生化自动仪测试法：取A组试剂0.18~0.28ml加入被测样本0.025~0.035ml，混合后放入生化自动仪中，在30℃~40℃水浴4~7分钟后测定吸光值，然后加入B组试剂0.03~0.07ml混合后继续水浴10~25分钟，测定吸光值，最终测得结果与所述定标液的定标曲线进行对照，根据定标曲线得出被测样本总蛋白含量。

6.根据权利要求5所述的镍-双缩脲试剂盒的制备方法所制得产品的应用方法，其特征在于：步骤b的手工比色法中所述分光光度仪在波长为420nm~ 470nm处进行吸光值测定。

7.根据权利要求5所述的镍-双缩脲试剂盒的制备方法所制得产品的应用方法，其特征在于：步骤b中所述被测样本的总蛋白含量在50mg/L~8000mg/L范围内呈线性。

8.根据权利要求5所述的镍-双缩脲试剂盒的制备方法所制得产品的应用方法，其特征在于：所述步骤b的生化自动仪测试法中测定吸光值时所在的主波长为420nm~470nm ，副波长为650nm~700nm。

9.根据权利要求5所述的镍-双缩脲试剂盒的制备方法所制得产品的应用方法，其特征在于：所述被测样本在尿液样本、脑脊液样本中任选一种。

10.根据权利要求5所述的镍-双缩脲试剂盒的制备方法所制得产品的应用方法，其特征在于：所述步骤b的手工比色法中，所述空白镍-双缩脲试剂是指取所述A组试剂1.8~2.8ml与B组试剂0.3~0.7ml混合，然后用等量的生理盐水或蒸馏水代替被测样本加入到A组试剂与B组试剂的混合液中，所述空白镍-双缩脲试剂用于对被测样本所测得的颜色进行校准。