[发明专利]栀子苷元的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于中药领域，具体涉及一种栀子苷元的制备方法。

背景技术

中药栀子为茜草科植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实，具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等作用，在中医临床常用于治疗黄疸型肝炎、扭挫伤、高血压、糖尿病等症。栀子果实主要含有栀子苷(Geniposide)、栀子苷酸(Geniposidic acid)、异栀子苷(Gardenoside)、京尼平-1-β-D-龙胆双糖苷(Genipin-1-β-D-gentiobioside)等环烯醚萜苷类成分，亦含有黄酮类栀子素(Gardenin)，三萜类化合物藏红花素(Crocin)、藏红花酸(Crocetin)及α-藏红花甙元(α-Crocetin)。现代药理研究表明，栀子苷在消化道内给药时，因水解而生成栀子苷元，栀子苷元在显著增加胆汁流量时，能使胆汁中胆汁酸浓度下降，但对胆汁酸的排泄量基本无影响。栀子苷元对胃机能产生抗胆碱能性的抑制作用，栀子苷元十二指肠给药，对幽门结扎大鼠呈胃液分泌抑制，胃液总酸度减小，胃液pH值上升。

栀子苷元是栀子苷经水解后的产物，是一种优良的天然生物交联剂，可以与蛋白质、胶原、明胶和壳聚糖等交联制作生物材料，如人造骨骼、伤口包扎材料等。也可用于治疗肝脏疾病、降压、通便等。以色列一家医疗中心的研究结果表明，栀子苷元可以缓解II型糖尿病的症状。

在现有技术中，在申请号为201010105535.7的中国发明专利中，公开了以海藻酸钠为载体、戊二醛为交联剂对糖苷水解酶进行固定化，固定化糖苷水解酶酶在醋酸-酸酸钠缓冲液和乙酸乙酯组成的双相系统中催化水解栀子苷，使栀子苷转化成为栀子苷元。论文《β-葡萄糖苷酶水解栀子苷的工艺研究》公开了采用β-葡萄糖苷酶水解的方法将栀子苷转化为苷元。

现有公开的栀子苷元制备工艺存在步骤复杂，且栀子苷元易与蛋白质(酶)发生聚合反应，栀子苷元得率较低，不能满足工业化生产的需求。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用栀子苷制备高得率栀子苷元的方法。

为了解决上述技术问题，本发明是通过以下方式实现的：

一种栀子苷元的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

(1)酶解料液的配制：以水为溶剂，加入栀子苷，复合纤维素酶，无水乙酸钠，冰醋酸，搅拌混匀，得栀子苷酶解料液；

(2)酶解反应：将栀子苷酶解料液搅拌，15～70℃，反应12～36h，10000～20000r/min离心10～45min，弃沉淀，留上清液，上清液挥干溶剂，得到栀子苷元。

该方法所述的酶解栀子苷步骤中采用的栀子苷原料为栀子苷含量为40％以上纯度，采用的酶优选为160～200万活力单位的复合纤维素酶，所述的水用量优选为每1kg栀子苷用水20～30L；复合纤维素酶与栀子苷质量比优选为0.5～1.5∶0.5～1.5，无水乙酸钠与栀子苷质量比优选为0.3～0.5∶0.6～1.2，冰醋酸与栀子苷质量比优选为0.1～0.4∶0.8～1.2。所述的酶解反应条件优选为在25～60℃下反应15～30h。

以下采用部分实验例对本发明进行进一步解释：

一、温度对酶解的影响

配制四组酶解液，栀子苷浓度为40mg/mL(原料栀子苷含量为60％粉末)，酶苷质量比为1∶1，乙酸-乙酸钠缓冲盐pH4.5，将四组酶解液分别以静置冷藏(0-4℃)、静置常温(15-25℃)、水浴搅拌(50℃)、水浴搅拌(70℃)四种方式进行处置。第一组样品每隔12h取样检测，第二、三、四组样品每隔4h取样检测分析，所得结果见表1。

表1

结果表明，15～70℃均有较好的酶解效果，其中温度为25℃时酶解效果最好。

二、时间对酶解的影响

25℃下，配制酶解液，栀子苷浓度为40mg/mL(原料栀子苷含量为60％粉末)，酶苷质量比为1∶1，乙酸-乙酸钠缓冲盐pH4.5，开搅拌器，酶解36小时，每隔4小时取样，HPLC检测栀子苷与苷元含量变化。结果见附图1。

由附图1可知，栀子苷元在反应的24h内有明显的增长，在15-30h内效果较好，在20-24h左右维持高点稳定。

三、不同酶对酶解效果的影响

按照表2所示分别配制三组反应液。

表2三组反应液成分配制比例表