[发明专利]一种脂联素受体配基及激动剂的筛选方法

权利要求书

1.一种脂联素受体配基的筛选方法，其特征在于：采用极化荧光技术筛选脂联素受体配基。

2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：其包括如下步骤：

（1）取脂联素用荧光分子标记，将脂联素受体与荧光标记的脂联素混合，得混合溶液；

（2）取待测样品，梯度稀释，分别与步骤（1）中混合溶液混合，测定极化荧光值并计算其亲和度；

（3）根据亲和度，判断待测化合物是否为脂联素受体的配基。

3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于：步骤（1）所述荧光标记的脂联素中，荧光分子与脂联素的摩尔比为1:1，荧光分子的标记位置在脂联素的N端。

4.根据权利要求3所述的筛选方法，其特征在于：所述脂联素为gAPN和/或fAPN；所述荧光分子为异硫氰酸荧光素或四甲基罗丹明。

5.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于：步骤（1）所述脂联素受体的浓度为0.5~5μmol；荧光标记的脂联素的浓度为100~600nmol。

6.根据权利要求5所述的筛选方法，其特征在于：所述脂联素受体的浓度为1μmol；荧光标记的脂联素的浓度为100nmol。

7.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于：步骤（2）中，所述待测样品的初始浓度为5~15mM，进行6~12次对半稀释；待测样品与步骤（1）中混合溶液以体积比1：18~20混合。

8.根据权利要求7所述的筛选方法，其特征在于：所述待测样品的初始浓度为10mM，进行7次对半稀释；与步骤（1）中混合溶液以体积比1：19混合。

9.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于：极化荧光技术为双重极化荧光技术。

10.一种脂联素受体激动剂的筛选方法，其特征在于：其包括如下步骤：取待检样品，采用权利要求1~9任意一项所述方法筛选，再用细胞培养免疫极化荧光技术筛选。

11.根据权利要求10所述的筛选方法，其特征在于：所述细胞培养免疫极化荧光技术包括如下步骤：

a、取脂联素受体配基与细胞共培养6~18h；

b、裂解细胞，加入荧光标记的AMPK或者PPARα，以及AMPK抗体或者PPARα抗体；

c、测定其极化荧光值并计算其亲和度；

d、根据亲和度，判断待测化合物是否为脂联素受体的激动剂。

12.根据权利要求11所述的筛选方法，其特征在于：步骤a中所述细胞为骨骼肌C₂C₁₂细胞或者肝脏HepG2细胞。

13.根据权利要求11所述的筛选方法，其特征在于：所述步骤b中，荧光为异硫氰酸荧光素；荧光标记的AMPK或者PPARα的浓度为0.2~0.3nM；AMPK抗体或者PPARα抗体的浓度为0.1~0.15nM。