[发明专利]一种适合双向电泳的蚯蚓蛋白样品制备方法无效
申请号: | 201210393643.8 | 申请日: | 2012-10-16 |
公开(公告)号: | CN102914460A | 公开(公告)日: | 2013-02-06 |
发明(设计)人: | 王金花;葛伟丽;朱鲁生;王军;谢慧;王慧 | 申请(专利权)人: | 山东农业大学 |
主分类号: | G01N1/28 | 分类号: | G01N1/28 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 271018 *** | 国省代码: | 山东;37 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 适合 双向 电泳 蚯蚓 蛋白 样品 制备 方法 | ||
1.一种制备蚯蚓总蛋白双向电泳样品的方法,其特征在于包括以下步骤:
1)取吐泥1d后的蚯蚓于液氮中快速研磨成蚯蚓干粉,研磨时间为5-15min;
2)按蚯蚓干粉质量与以丙酮为溶剂的溶液A的体积之比为1:10的比例,向蚯蚓干粉中加入适量溶液A充分混合,-20℃静置8-12h,得到蚯蚓总蛋白样品;
所述以丙酮为溶剂的溶液A中的溶质为:0.01-0.03mmol/L的二硫苏糖醇、10%(w/v)的三氯乙酸;
3)步骤2)中所得的蚯蚓总蛋白样品离心20-30min:4℃,转速12000-15000g,弃上清液;用-20℃下预冷的以丙酮为溶剂的溶液A洗涤沉淀,-20℃静置1-2h,弃上清液;使用溶液A洗涤沉淀3次以上,直至上清液为无色透明为止,弃上清液,收集沉淀,得到蚯蚓总蛋白粗提物;
4)收集沉淀,得到蚯蚓总蛋白粗提物;
5)将步骤4)中得到的蚯蚓总蛋白粗提物溶解于裂解缓冲液中振荡混合1-2min后冰浴冷却1min,如此重复振荡混合1-2h;裂解缓冲液包括9.8mol/L尿素(urea),4%(w/v)的3-[3-(胆酰氨丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS),65mmol/L二硫苏糖醇(DTT),2%(v/v)的胶条缓冲液(IPG buffer),1%(w/v)的苯甲基磺酰氟(PMSF);所述裂解缓冲液与蚯蚓总蛋白样品的质量体积比为0.04g/400μL-0.05g/400μL;
6)将步骤5)中混合液离心取上清液得到适合双向电泳的蚯蚓总蛋白样品。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东农业大学,未经山东农业大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210393643.8/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇:新型低压滤波补偿成套装置
- 下一篇:一种高固体环氧磷酸锌底漆涂料及其制备方法