[发明专利]一种草莓根尖脱毒与组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物脱毒与组培技术领域，尤其一种草莓根尖脱毒与组培方法。 

背景技术

草莓作为一种经济作物，其种苗的茎尖脱毒组培快繁，是一种常规采用的技术。但在草莓茎尖组培快繁的过程中，存在有操作难度大、工作效率低（在显微镜下，用手术工具剥离0.02mm茎尖），难以彻底消毒，组培苗污染率高。至目前，关于采用以草莓的根尖为外植体进行脱毒和组培的技术，尚未见有成熟技术的文献报导。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种草莓根尖脱毒与组培方法，可以解决草莓组培传统茎尖脱毒技术所存在的效率低、消毒难彻底、组培苗污染率高等问题，操作效率高、消毒彻底、组培苗污染率低。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种草莓根尖脱毒与组培方法，该方法包括以下步骤：

1）培养基的制备：以MS培养基为基本培养基，附加6–苄氨基嘌呤5～7.5mg/L，2,4–二氯苯氧乙酸0.3～0.5mg/L后制得pH值为5.8～6.0的根尖诱导培养基；

以MS培养基为基本培养基，附加6–苄氨基嘌呤5～7.5mg/L，a–萘乙酸0.2～0.5mg/L后制得pH值为5.8～6.0的继代增殖培养基；

以1/2MS培养基为基本培养基，附加吲哚乙酸0.2～0.5mg/L后制得pH值为5.8～6.0的生根培养基；

 2）材料预处理和根尖外植体的选取、灭菌：将草莓放入灭菌细沙内于38℃±2℃下进行热处理4～6周至抽生出新根系；取1～2cm长主根根尖，用无菌滤纸吸干表面水分，在显微镜下将主根根尖前端长1～2mm的根尖切下作为外植体；

3）根尖诱导再生植株培养：将外植体接种在根尖诱导培养基上，在28±2℃、光强800lux、光照12小时/d下培养，至四周后其余条件不变光强增强到1600lux，六周后光强增强到3200lux，八周后光强减弱到1200lux下继续培养直至从根尖诱导出再生植株幼芽，此阶段总共需培养2～3个月；

4）幼芽增殖培养：将植株幼芽接种在继代增殖培养基上，在28±2℃，光强2000～3000lux、光照12小时/d下培养至长成8～10cm长小苗；

5）继代生长培养：将小苗剪成2～2.5cm长小段接种在生根培养基上，在28±2℃，光强2000～3000lux、光照12小时/d下培养至长成8～10cm长小苗；以后每隔3～4周将小苗按同上述方法进行一次继代扩繁，直到满足苗数要求；

6）生根培养：将继代扩增小苗接种在生根培养基上，在28±2℃，光强2000～3000lux、光照12小时/d下培养，1周后长出根系成为完整试管苗。

步骤2）中，对长主根根尖消毒的方法为放入70%酒精中浸泡30秒，再用质量百分浓度为10.5%次氯酸钠溶液消毒8分钟及无菌水洗6次。

MS培养基的成分为（mg/L）：

ⅰ）NH₄NO₃ 33000、KNO₃ 38000、CaCl₂·2H₂O 8800、MgSO₄·7H₂O 7400、KH₂PO₄ 3400；

ⅱ）KI 166、H₃BO₃ 1240、MnSO₄·4H₂O 4460、ZnSO₄·7H₂O 1720、Na₂·MoO₄·2H₂O 50、CuSO₄·5H₂O 5、CaCl₂·6H₂O 5；

ⅲ）FeSO₄·7H₂O 5560、Na₂·EDTA·2H₂O 7460；

将配制好的MS培养基用水稀释两倍后得到1/2MS培养基。

本发明提供的一种草莓根尖脱毒与组培方法，有益效果如下：