[发明专利]一种水杨苷对照品的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及对照品的制备领域，确切地说是指一种水杨苷对照品的制备工艺。

背景技术

水杨苷为白色结晶；味苦；熔点199～202℃，比旋光度【α】厍-45.6°（0.6克/100厘米3无水乙醇）；可溶于水，易溶于沸水，难溶于乙醇(1:90)，不溶于醚或氯仿，但能溶于碱溶液、吡啶或冰醋酸中，其水溶液呈中性反应，分子中无游离酚羟基，属于酚苷类化合物；经稀酸或苦杏仁酶水解，可生成葡萄糖和水杨醇。水杨醇的分子式为C7H8O2；为斜方无色针晶；熔点86～87℃；热至100℃升华；可溶于水、苯，易溶于乙醇、醚、氯仿；遇硫酸呈红色。目前，现有技术的水杨苷对照品的制备工艺存在一定缺陷，需要改进，以更好地符合中药标准品的要求。

发明内容

针对上述缺陷，本发明解决的技术问题在于提供一种水杨苷对照品的制备工艺，能够很好地符合中药标准品的要求。

为了解决以上的技术问题，本发明提供的水杨苷对照品的制备工艺，包括如下步骤：

（1）杨树花中水杨苷提取：取杨树花4kg，剪碎，加15倍量水煎煮提取两次，每次1.2-1.8h，合并两液，过滤，滤液静置过夜，取上层澄清提取液A，备用；

（2）大孔树脂初步分离水杨苷，包括以下步骤（21）和步骤（22）：

（21）大孔树脂的预处理：取大孔树脂D-1015kg，加丙酮8000-10000ml搅拌，浸泡10-14小时，装入层析柱，排尽丙酮，蒸馏水冲洗至无丙酮味，加92%-98%乙醇冲洗后，加蒸馏水28-32L浸泡，用4%-6%盐酸4-6L冲洗树脂后，加蒸馏水冲洗至pH至6-7，用4%-6%NaOH4-6L冲洗树脂，后用蒸馏水冲洗至pH至6-7，加92%-98%乙醇浸泡过夜，放出乙醇，用蒸馏水冲洗至无醇味，备用；

（22）吸附和解吸附：将步骤（1）中提取液A加入大孔吸附树脂中上样吸附24h以上，吸附速率为10-16L/h，用水洗至流出液变为浅黄色后，用15%-25%乙醇洗树脂至TLC检测无水杨苷，收集15%-25%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液B，保存备用；

（3）正丁醇萃取：取浓缩液B，加正丁醇萃取3次，每次6-10L，合并萃取液，减压回收正丁醇，回收完毕后样品中加少量甲醇，继续回收溶剂，得水杨苷样品粗品C；

（4）正相硅胶法分离纯化水杨苷：取200目-300目的硅胶1.2-1.8kg，加2-4L氯仿-甲醇=8：1溶液混合均匀，装柱；取样品粗品C，加甲醇溶解，加硅胶150-250g拌样，旋转蒸发回收溶剂后，上样，依次采用氯仿-甲醇比例依次为7：1、4：1、3：1的溶液及纯甲醇梯度洗脱，分段收集各流份；洗脱产品分别以TLC检测，合并含水杨苷且杂质干扰小的洗脱液，回收适量溶剂，待析出晶体后，用少量甲醇润洗，过滤，得水杨苷粗品D，备用；

（5）水杨苷的重结晶：取水杨苷粗品D，加适量甲醇热溶，室温冷却结晶，待析出晶体后，过滤，收集结晶，如此重复操作至滤液无色，收集结晶，至真空干燥箱中干燥，得水杨苷标准品。

优选地，在步骤（1）中，取上层澄清提取液A的体积为90L-100L。

优选地，在步骤（2）中：

（21）大孔树脂的预处理：取大孔树脂D-1015kg，加丙酮8000-10000ml搅拌，浸泡12小时，装入层析柱，排尽丙酮，蒸馏水冲洗至无丙酮味，加95%乙醇冲洗后，加蒸馏水30L浸泡，用5%盐酸5L冲洗树脂后，加蒸馏水冲洗至pH至6-7，用5%NaOH5L冲洗树脂，后用蒸馏水冲洗至pH至6-7，加95%乙醇浸泡过夜，放出乙醇，用蒸馏水冲洗至无醇味，备用；

（22）吸附和解吸附：将步骤（1）中提取液A加入大孔吸附树脂中上样吸附24h以上，吸附速率：14L/h，用水洗至流出液变为浅黄色后，用20%乙醇洗树脂至TLC检测无水杨苷，收集20%乙醇洗脱液，减压回收乙醇至无醇味，得浓缩液B，保存备用。

优选地，在步骤（3）中：取浓缩液B，加正丁醇萃取3次，每次8L，合并萃取液，减压回收正丁醇，回收完毕后样品中加少量甲醇，继续回收溶剂，得水杨苷样品粗品C。