[发明专利]一种柳杉组织培养快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养繁殖技术领域，具体涉及一种柳杉组织培养快速繁殖方法，特别是一种以柳杉茎段为外植体材料，用自制培养基先诱导柳杉产生不定芽，进而诱导生根获得再生植株。

背景技术

柳杉（Cryptomeria fortunei）为杉科柳杉属（Cryptomeria D. Don），别名孔雀杉，乔木，高达4m，胸径可达2m多；树皮红棕色，纤维状，裂成长条片脱落；大枝近轮生，平展或斜展；小枝细长，常下垂，绿色，枝条中部的叶较长，常向两端逐渐变短。叶钻形略向内弯曲，先端内曲，四边有气孔线，长1~1.5cm，果枝的叶通常较短，幼树及萌芽枝的叶长达2.4cm。

柳杉是我国重要的用材树种之一。在我国柳杉主要分布于福建、浙江、江西等省。由于受经济利益的驱使，近年来柳杉资源遭受严重破坏，再加上酸雨、大气污染的危害和病虫侵害，目前大径柳杉已屈指可数。目前柳杉以种子繁育为主，扦插也可采用，但通常发芽率、合格苗率低。对其繁殖的研究也主要对实生苗繁育技术的研究。因此，利用生物技术方法进行人工快速繁殖，对柳杉的资源保护有重要意义。

张翠萍（2008）初步研究了其组织培养快速繁殖技术，但该研究以柳杉种胚为外植体，不适合具优良基因型柳杉个体的繁殖培养，且在实验中只采用了MS为基本培养基，对外源激素的添加只采用了单因素设计，未对其他基本培养基和组合激素进行选择培养实验。本申请人选取优良基因型柳杉茎段作为外植体材料，通过实验选择DCR为最适基本培养基，对外源激素的添加进行了多因素设计，并添加活性炭等，为柳杉的组织培养快速繁殖提供了有效途径。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种组织培养快速繁殖柳杉的方法。

技术方案：为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一种柳杉组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

（1）取柳杉外植体茎段，接种于诱导不定芽培养基，诱导培养产生不定芽；其中，诱导不定芽培养基为：DCR＋0.1~2.0mg/L 6-BA（6-苄基嘌呤）＋0.1~2.0mg/L IBA（吲哚丁酸）＋0.5~5.0g/L AC（活性炭）＋0.001~0.01mg/L TDZ（噻苯隆）+30.0g/L蔗糖；

（2）生根培养采用两阶段发根：先将已伸长且生长较健壮的嫩芽放入生根培养基1，进行2~15d暗培养后，放入光照下培养5~30d；然后转接于生根培养基2，继续培养至生根；其中，生根培养基1为：1/2DCR＋0.1~2.0mg/L NAA＋0.1~2.0mg/L IBA＋0.1~1.0mg/L 6-BA+1.0~10.0g/L AC＋10.0~30.0g/L蔗糖，生根培养基2为：DCR+0.1~1.0mg/L NAA＋0.1~1.0mg/L 6-BA+0.5~5.0g/L AC+30.0g/L蔗糖。

步骤（1）中，所述诱导不定芽培养基为：DCR＋1.0mg/L 6-BA＋0.5mg/L IBA＋0.01mg/L TDZ＋3.0g/L AC+30g/L蔗糖。

步骤（2）中，所述生根培养基1为：1/2DCR＋2.0mg/L NAA＋1.0mg/L IBA＋0.5mg/L 6-BA＋0.5mg/L IBA＋5.0g/L AC＋25g/L蔗糖。

步骤（2）中，所述生根培养基2为：DCR+0.5mg/L NAA＋0.5mg/L 6-BA＋3.0g/L AC＋30.0g/L蔗糖。

步骤（2）中，在所述的1/2DCR培养基配方中，大量元素比常规DCR减少1/2的量。

步骤（2）中，所述光照下的光照时间为14~16h，光照强度为1200~1300Lux，温度为25~28℃。

该方法，选取优良基因型柳杉茎段作为外植体材料，通过以DCR为最适基本培养基，对外源激素的添加进行了多因素设计，并添加活性炭等，为柳杉的组织培养快速繁殖提供了有效途径。

有益效果：与现有技术相比，本发明的显著优点是：以具优良基因型柳杉个体茎段为外植体，以DCR为基本培养基，附加不同种类、不同浓度的植物生长调节剂和活性炭诱导芽增殖和诱导生根，通过本方法，嫩芽增殖系数达到5.7以上，生根率为80%以上。培养周期短，繁殖量大，有利于规模化生产。

附图说明

图1诱导获得的柳杉不定芽；

图2诱导生根后形成柳杉完整植株。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。