[发明专利]一种高纯度海帕刺桐碱的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别是涉及一种高纯度海帕刺桐碱的制备方法。

背景技术

海帕刺桐碱（Hypaphorine）又叫下箴刺桐碱，CAS号：487-58-1，分子式：C₁₄O₁₈N₂O₂，分子量246.3，分子结构：

。

研究结果显示，海帕刺桐碱能明显抑制小鼠耳廓肿胀，减少小鼠耳廓重量；增加小鼠胸腺、脾脏重量,提高小鼠血清溶血素水平；明显降低CCL4和异硫氰酸萘酯所致肝损伤小鼠血清中转氨酶活性及胆红素含量，保护肝损伤。

小叶锦鸡儿为蔷薇目豆科的植物，果实、花、根入中药，中药果实：味苦，性寒。清热解毒。花：味甘，性平。养血安神。根：味甘、微辛，性微温。祛风止痛，祛痰止咳。

海帕刺桐碱的制备方法多采用硅胶柱、凝胶柱和制备液相方法分离。如文献“微波辅助提取-高效液相色谱分析制备鸡骨草中相思子碱和下箴刺桐碱的研究”。但是，固体填充柱分离存在收率低、产出小、操作复杂，溶剂用量大、污染严重等缺点。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷和不足，提供一种高纯度海帕刺桐碱的快速、简便的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种高纯度海帕刺桐碱的制备方法，其特征在于以下步骤：

I小叶锦鸡儿原料粉碎，加酸性水浸泡提取2～3次，提取液超滤膜超滤后再用纳滤膜浓缩，浓缩液加乙醇溶液沉淀，得沉淀物；

II上述沉淀物采用采用高速逆流色谱分离，紫外检测器在线监测，收集目标流分，减压干燥得海帕刺桐碱。

步骤I中所述的超滤膜可选截留分子量10000～2000的中空纤维素膜，纳滤膜为截留分子量200～100的中空纤维素膜。

步骤II中所述的高速逆流色谱分离的溶剂系统可选氯仿、甲醇、水组合，比例为3～10:3～5:4～9，上相为下定相，上相为流动相。

本发明的优势有：

1）生产过程采用膜分离技术，是一种物理除杂过程，无需高温，同时纳滤过程产生的液体可以重新利用，减少对环境污染；

2）纯化过程产用高速逆流色谱分离是一种高效、快速分离方法，可以连续制备，样品无损失，对环境友好。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明。

实施例1：

取1kg小叶锦鸡儿原料粉碎，每次用8倍量pH2的盐酸水溶液常温浸泡4小时，提取2次，提取液过滤后加入截留分量2000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量200的中空纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加乙醇溶液沉淀，过滤得沉淀物。取氯仿、甲醇、水按5:3:5混合，充分分层后，取下相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机800rpm，泵入上相做流动相，待系统平衡后，流速调节为3ml/min，同时用流动相溶解沉淀物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续分离，合并流分减压干燥得白色粉末海帕刺桐碱2.1g，经HPLC检测，纯度99.5%。

实施例2：

取1kg小叶锦鸡儿原料粉碎，每次用6倍量pH3的硫酸水溶液常温浸泡3小时，提取3次，提取液过滤后加入截留分量5000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量100的中空纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加乙醇溶液沉淀，过滤得沉淀物。取氯仿、甲醇、水按7:3:4混合，充分分层后，取下相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机900rpm，泵入上相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解沉淀物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续分离，合并流分减压干燥得白色粉末海帕刺桐碱1.9g，经HPLC检测，纯度98.1%。

实施例3：

取1kg小叶锦鸡儿原料粉碎，每次用5倍量pH2的硫酸水溶液常温浸泡3小时，提取3次，提取液过滤后加入截留分量3000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量100的中空纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加乙醇溶液沉淀，过滤得沉淀物。取氯仿、甲醇、水按5:4:6混合，充分分层后，取下相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机800rpm，泵入上相做流动相，待系统平衡后，流速调节为1ml/min，同时用流动相溶解沉淀物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续分离，合并流分减压干燥得白色粉末海帕刺桐碱2.3g，经HPLC检测，纯度96.5%。

实施例4：

取1kg小叶锦鸡儿原料粉碎，每次用8倍量pH2的硫酸水溶液常温浸泡4小时，提取2次，提取液过滤后加入截留分量3000的中空纤维素膜超滤，透过液再用截留分子量100的中空纤维素纳滤膜浓缩，浓缩液加乙醇溶液沉淀，过滤得沉淀物。取氯仿、甲醇、水按6:5:2混合，充分分层后，取下相注满高速逆流色谱柱，同时开转主机700rpm，泵入上相做流动相，待系统平衡后，流速调节为2ml/min，同时用流动相溶解沉淀物，由进样阀进样，紫外检测器监测，收集目标流分，连续分离，合并流分减压干燥得白色粉末海帕刺桐碱2.0g，经HPLC检测，纯度97.1%。