[发明专利]基于表位抗原肽的抗内皮素受体A抗体酶联免疫检测方法及其在CTD-PAH中的应用

权利要求书

1.一种基于表位抗原肽的抗内皮素受体A抗体酶联免疫检测方法，其特征在于，通过体外合成4个长度不一的胞外肽段，筛选到与全长ENRA一致性良好的表位肽段，由人工合成该表位肽段作为抗原肽包板，建立基于表位抗原肽的抗内皮素受体A抗体酶联免疫检测方法，所述表位抗原肽为包含如下氨基酸序列的肽段：

DNPERYSTNLSNHVDDFTTFRGTELSFLVTTHQPTNLVLPSNGSMHNYCPQQTKIT。

2.根据权利要求1所述的一种基于表位抗原肽的抗内皮素受体A抗体酶联免疫检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）、将5ug/ml的抗原肽在碳酸缓冲液中包被96孔板过夜后，PBS-T洗涤三次；

2）、3%的牛血清白蛋白或0.3%明胶和10%胎牛血清封闭2小时，PBS-T洗涤三次；

3）、患者血清1：100-1：300稀释后，加入酶标板室温下反应1小时，PBS-T洗涤三次；

4）、加入适当比例稀释的辣根过氧化物酶-抗人IgG二抗，室温反应1小时；

5）、加入TMB底物反应10分钟后，用2M硫酸终止反应；

6）、酶标仪吸光度450nM读板测吸光度值。

3.根据权利要求1或2所述的一种基于表位抗原肽的抗内皮素受体A抗体酶联免疫检测方法，其特征在于，所述表位抗原肽包括所有氨基酸序列，及其排列顺序。

4.根据权利要求1或2所述的一种基于表位抗原肽的抗内皮素受体A抗体酶联免疫检测方法，其特征在于，所述内皮素受体A表位抗原多肽片段用于制备诊断和评估结缔组织病合并肺动脉高压以及定性和定量检测人血清中抗内皮素受体A抗体的试剂和试剂盒。

5.根据权利要求1或2所述的基于表位抗原肽的抗内皮素受体A抗体酶联免疫检测方法，其特征在于，该方法在CTD-PAH作为生物标记物检测的应用。

6.根据权利要求5所述的基于表位抗原肽的抗内皮素受体A抗体酶联免疫检测方法，其特征在于，其中CTD包括系统性红斑狼疮、硬皮病、混合性结缔组织病、炎症性肌病、干燥综合征、类风湿关节炎、系统性血管炎和抗磷脂抗体综合症。