[发明专利]一种VEGF单抗及包含该单抗的骨折愈合评价抗体芯片

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种VEGF单抗及包含该单抗的骨折愈合评价抗体芯片。

背景技术

血管生成在骨折愈合过程中具有重要意义。新的血管形成可能与诸多因素有关，如成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白、转化生长因子。血小板衍生长因子、前列腺素E、血管内皮细胞生长因子、肿瘤坏死因子、胰岛素生长因子Ⅰ等。

血管内皮细胞生长因子(VEGF)对内皮细胞有促进其增殖和血管生成，增加血管通透性，尤为重要。VEGF通过与血管内皮细胞上的受体结合，具有强大、特异性促血管内皮细胞增生和血管生成作用，是促血管再生的最终通道，其他因子的促血管生成作用是全部或部分通过VEGF的作用得以实现。应用VEGF使骨折端血流量在一定时间内较对照组增高;抗VEGF可导致骨折端血流量明显减少，说明VEGF对骨折端血流量变化可能影响骨折愈合，有重要意义。

脑外伤后体液中存在促进骨髓基质干细胞有丝分裂和增殖的细胞因子。其中骨形态发生蛋白（BMP-2）是骨折成功愈合的极重要的因素，然而骨形态发生蛋白似乎并非是脑外伤后骨折愈合加速因素之一；脑外伤后碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）阳性表达提前出现，与血管内皮细胞生长因子(VEGF)有明显的时间和浓度关系，通过血管内皮细胞生长因子的表达促进成骨化；胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)在骨折愈合中主要促进软骨的生长；脑源性神经（BDNF）营养因子在骨折愈合各个阶段均有促进作用；血小板衍生因子血清浓度明显低于其他组，作用机制可能是通过血清中胰岛素生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)含量的升高以及局部血小板衍生因子的聚集来完成的，胰岛素生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)血清浓度升高的时间和血小板衍生因子(PDGF)降低的时间均集中在前两周，时间上一致，两者之间可能有协同作用；上皮生长因子（EGF）主要是由炎症细胞单核/巨噬细胞分泌，同时作用于修复细胞成纤维细胞、内皮细胞、表皮细胞等，具有促进细胞增殖的功能。但是，高效价、高特异性的抗人VEGF单克隆抗体及骨折愈合评价抗体芯片目前尚未见到报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种VEGF单抗及包含该抗体的芯片以及应用。

本发明的整体技术构思是：利用自主设计合成的VEGF多肽（序列为IFQEYPDEIE YIFKPS）经免疫动物、细胞融合、亚克隆及酶联免疫吸附实验进行特异性筛选技术，获得高效价、高特异性抗人VEGF单克隆抗体，由于此单抗效价高、特异性好，与另外7种与骨折愈合相关的单克隆抗体点制的抗体芯片，结合CY3标记的补体C3抗体与被检产品建立了完整的检测系统，用于检测及评价骨折愈合效果。此抗体芯片具有灵敏度高，特异性好、操作简单、高通量等优点，可用于临床和体检血清的监测和质控。

作为优选，所述单克隆抗体包括单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体、以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。

本发明所述“抗体”应该解释为涵盖具有所需特异性的结合结构域的任意特异性结合因子。因而，这个术语涵盖了与之同源的抗体片段、衍生物、人源化抗体以及抗体的功能等同物和同源物，也包括含有抗原结合结构域的任何多肽，无论是天然的还是合成产生的。抗体的实例是免疫球蛋白亚型(如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亚型亚类；也可以是包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd；和双链抗体(diabodies)。融合至另一多肽的、包含抗原结合结构域的嵌合体分子或者等同物也包括在其中。嵌合抗体的克隆与表达在EP．A-0120694和EP．A．0125023中描述。

本发明所述单克隆抗体可以是，例如，单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体、以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。

抗体可以通过许多方式修饰，可用DNA重组技术来产生保留原来抗体特异性的其它抗体或嵌合分子。这种技术可以包括将编码抗体的免疫球蛋白可变区或互补性决定区(CDRs)的DNA引入不同免疫球蛋白的恒定区或恒定区加框架区。参见，EP．A．184187，GB 2188638A或．EP．A．239400。还可以对杂交瘤细胞或产生抗体的其它细胞进行遗传突变或其它改变，这可以改变或者不改变所产生抗体的结合特异性。