[发明专利]一种通过红姜花体细胞胚胎发生途径高效再生植株的方法

权利要求书

1.一种通过红姜花体细胞胚胎发生途径高效再生植株的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）愈伤组织的诱导和胚性愈伤组织的优化增殖：以红姜花未成熟的花丝和/或花药为外植体，接种于愈伤组织诱导培养基上诱导培养出愈伤组织；将诱导出的愈伤组织继代培养在愈伤组织优化与增殖培养基上，得到黄白色粉状的胚性愈伤组织；

（2）均一稳定的胚性细胞悬浮培养系的建立：将步骤（1）的黄白色粉状的胚性愈伤组织0.5～2.0g转入液体培养基中，置于90～110rpm摇床上悬浮培养1～2个月，得到分散、均质的胚性细胞悬浮培养系；

（3）体细胞胚胎的诱导：取步骤（2）得到的胚性细胞悬浮培养系，调整细胞密度为10%SCV悬浮培养物，取0.5～2.0mL 10%SCV悬浮培养物接种于体胚诱导培养基中，置于28±1℃黑暗中进行体细胞胚胎诱导，得到成熟体细胞胚胎；

（4）体细胞胚胎的萌发及其植株再生：将步骤（3）诱导出的成熟体细胞胚胎转入体胚萌发培养基中，置于28±1℃黑暗培养，待叶鞘抽出后，将其转至生根壮苗培养基中继续培养，进一步发育成健壮的红姜花再生小植株；

所述的愈伤组织诱导培养基的组成为：MS培养基+（2～4）mg·L^-12,4-D+（2～4）mg·L^-1NAA+1mg·L^-16-BA+30g·L^-1蔗糖+7g·L^-1琼脂粉，pH 5.8，高温高压灭菌；

所述的愈伤组织优化与增殖培养基的组成为：MS培养基+（1～2）mg·L^-12,4-D+（0.25～1）mg·L^-1NAA+（0.25～1）mg·L^-16-BA+30g·L^-1蔗糖+7g·L^-1琼脂粉，pH 5.8，高温高压灭菌；

所述的液体培养基的组成为：MS培养基的无机盐+100mg·L^-1麦芽水解物+100mg·L^-1谷氨酰胺+230mg·L^-1脯氨酸+（0.02～0.25）mg·L^-1NAA+（0.5～1）mg·L^-12,4-D+B₅培养基的维生素+45g·L^-1蔗糖，pH 5.3，高温高压灭菌。

2.根据权利要求1所述的一种通过红姜花体细胞胚胎发生途径高效再生植株的方法，其特征在于：

所述的体胚诱导培养基的组成为：SH培养基的无机盐+100mg·L^-1麦芽提取物+100mg·L^-1谷氨酰胺+230mg·L^-1脯氨酸+（0.02～0.25）mg·L^-1NAA+（50～250）μg·L^-1TDZ+B₅培养基的维生素+45g·L^-1蔗糖+7g·L^-1琼脂粉，pH 5.8，高温高压灭菌；

所述的体胚萌发培养基的组成为：SH培养基的无机盐+（0.25～2.0）mg·L^-16-BA+0.2mg·L^-1NAA+MS培养基的维生素+30g·L^-1蔗糖+7g·L^-1琼脂粉，pH 5.8，高温高压灭菌；

所述的生根壮苗培养基的组成为：1/2MS培养基+30g·L^-1蔗糖+0.1wt%活性炭+7g·L^-1琼脂粉，pH 5.8，高温高压灭菌。