[发明专利]一种正品大黄种子的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及正品大黄种子的检测方法，属于中药领域。

背景技术

大黄为蓼科植物掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum Maxim.ex Balf.或药用大黄Rheum officinale Baill.的干燥根及根茎。具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经的功效。用于实热便秘，积滞腹痛，泻痢不爽，湿热黄疸，血热吐衄，目赤，咽肿，肠痈腹痛，痈肿疔疮，瘀血经闭，跌打损伤，上消化道出血；外治水火烫伤。掌叶大黄分布于甘肃东南部、青海、四川西部、云南西北部及西藏东部；唐古特大黄分布于甘肃、青海、四川及西藏东北部；药用大黄分布于陕西南部、河南西部、湖北西部、四川、云南等地。华北大黄、河套大黄是常见的伪品大黄，易与唐古特大黄等正品大黄混淆。

近年来，由于对野生大黄资源的无计划采挖，导致野生大黄资源逐年减少，全国野生大黄资源已濒临枯竭。为满足市场对优质大黄日益增长的需求量，大黄人工种植规模不断扩大，而品质纯正的种子是药材栽培的前提，是提高药材产量和质量的根本保障。

目前，我国大黄种子没有检验标准和质量标准，主要是通过形状、大小、颜色、表皮、饰纹等性状进行鉴别，具有一定的局限性。申请号：201110337787.7，发明名称：一种鉴定真伪大黄种子的方法的专利申请公开了一种鉴别真伪大黄种子的方法，它包括如下步骤：（1）取待检种子，提取待检种子中的大黄酚和大黄素；（2）测定大黄种子中大黄酚和大黄素的含量；（3）计算大黄酚含量/大黄素含量的比值；（4）根据步骤（3）计算的比值判断：若比值大于1，判断该种子为正品大黄种子，若比值小于或者等于1，判断该种子为伪品大黄种子。该方法通过种子中大黄酚和大黄素含量的比值来确定大黄种子是否为正品，因精确测定某成分含量较难，误差较大，导致该方法使用不方便，准确度不够高。尤其针对在正品大黄种子中掺杂部分伪品的情况，容易得出错误的结论，难以替代传统检测方法。

需寻找一种更为简便、准确、可靠的方法鉴定正品、伪品，以及正伪混合的大黄种子的方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种正品大黄种子的检测方法。

本发明正品大黄种子的检测方法，，它是采用高效液相色谱法检测，包括如下步骤：

（1）取待检种子，粉碎，用甲醇提取，过滤，得滤液，除去甲醇，酸水解，用有机溶剂萃取，得有机溶剂层，回收溶剂至干，再溶解，制成供试品溶液；

（2）取芦荟大黄素对照品，溶解，制备对照品溶液；

（3）用高效液相色谱法检测，在供试品溶液的色谱图中，有色谱峰与芦荟大黄素对照品色谱峰保留时间一致，鉴定待检种子中含有正品大黄种子，色谱条件如下：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇-0.1％磷酸溶液，二者的体积比为（80~90）：（10~20）；检测波长：254nm。

其中，步骤（1）所述待检种子为掌叶大黄Rheum palmatum L.、唐古特大黄Rheum tanguticum’Maxim.ex Balf、华北大黄Rheum franzenbachiiMunt.或者河套大黄Rhum hotaoense C.Y.Cheng et C.T.Kao的种子。

其中，步骤（1）所述酸水解时，溶液中氢离子的浓度为2~3mol/L；所述有机溶剂为三氯甲烷。

优选地，所述步骤（1）中，将待检种子粉碎，过四号筛，得粉末，加甲醇，粉末与甲醇的质量体积比为1：150~185，加热回流30~90min，冷却，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，得续滤液，挥去溶剂，加浓度为6~10%的盐酸，超声处理1~3min，加等体积的三氯甲烷，加热回流60~80min，再用三氯甲烷萃取3次，每次所用三氯甲烷体积同盐酸体积，得三氯甲烷层，回收溶剂至干，加甲醇制成供试品溶液。

其中，所述步骤（3）中，甲醇与0.1％磷酸溶液的体积比为85：15。

它还包括定性检测方法，步骤如下：

1）取待检种子，粉碎，用甲醇提取，过滤，得滤液，挥去溶剂，酸溶液水解，用有机溶剂萃取，得水层；

2）取步骤1）所得水层，加1~3倍体积的浓氨水，震摇，无红棕色至棕褐色絮状沉淀；

3）鉴定待检种子为正品大黄种子。

其中，步骤1）所述酸水解，溶液中氢离子的浓度为0.52~2mol/L；有机溶剂为乙醚。