[发明专利]一种靶向降解Bcr-Abl蛋白的试剂及其在制备费城染色体阳性肿瘤治疗药物中的应用

说明书

技术领域

本发明公开一种靶向降解Bcr-Abl蛋白的方法和试剂及其在制备Ph阳性肿瘤治疗药物中的应用，属于医药和生化与细胞生物学技术领域，具体涉及冬凌草甲素在制药和临床治疗中靶向泛素化降解病原蛋白Bcr-Abl并抑制和杀伤Ph阳性肿瘤细胞，以及在临床和基础研究中作为一种诱导剂来分析Bcr-Abl及其相关信号通路的生物学功能。

背景技术

       肿瘤是威胁人类健康的头号杀手。2008年全球新增肿瘤患者1270万，死亡760万，并且这些数字仍在持续增长中。随着现代医学的发展，人们逐渐认识到肿瘤的形成是由于基因突变造成的，由此开发出多种以基因为靶点的分子靶向疗法，并在肿瘤治疗中取得了显著成效。

       染色体畸变是导致肿瘤细胞中基因突变的常见原因。1960年，两位美国科学家Peter Nowell和Dacid Hungerford在慢性髓性白血病（CML）病人的血液样品中发现了一个异常的染色体，由于是在美国费城（Philadelphia）发现的，故命名为费城染色体（Ph）。后来经染色体显带发现费城染色体是由9号染色体长臂(9q34)和22号染色体长臂(22q11)易位造成的，又被称为t(9; 22)(q34; q11)。费城染色体具有重要的临床意义：大约95%的慢性髓性白血病病例都是Ph阳性，因此可作为诊断的依据。另外，在急性髓性白血病、前B细胞和T细胞白血病/淋巴瘤中大约20%-30%的成人与2-10%的未成年患者中也能检测到费城染色体。

t (9; 22) (q34; q11)染色体易位产生一种致癌性的融合基因Bcr-Abl，该基因编码的融合蛋白产物具有异常增高的酪氨酸激酶活性，是导致慢性髓性白血病及其他Ph阳性肿瘤发生的首要原因。研究表明，Bcr-Abl融合蛋白还是造成Ph阳性肿瘤细胞对多种化疗药物不敏感的原因。在K562细胞及其它Ph阳性的肿瘤细胞中抑制Bcr-Abl蛋白，可以显著抑制和杀伤肿瘤细胞，还可以逆转这些肿瘤细胞对化疗药物的耐药性。

STI-571（格列卫）是靶向Bcr-Abl的酪氨酸激酶竞争性抑制剂，目前已经成为治疗慢性髓样白血病(CML)病人的一线用药，对于慢性期（CP）的CML病人具有良好的治疗效果。但是，对于加速期（AP）和急变期（BC）的病人，STI-571的治愈率很低，而且病人容易复发并最终演变成STI-571耐受的CML-BC。因此急需开发一些作用机制与STI-571不同的的抗肿瘤药物用于CML的治疗。

除了使用小分子抑制剂干扰癌蛋白的酶活性外，靶向癌蛋白的泛素化降解也是一种很好的分子靶向治疗策略。泛素化降解是细胞中重要的蛋白质质控系统，可以选择性降解细胞中不需要的蛋白质，例如一些短寿命的细胞周期调节蛋白、癌基因和抑癌基因产物以及变性变构蛋白等。在肿瘤细胞中，促进癌蛋白的降解对于逆转肿瘤恶性程度、改善治疗效果具有重要的意义。

冬凌草甲素是我国传统抗癌中药冬凌草中最主要的抗肿瘤活性成分，经鉴定属于贝壳杉烯类四环二萜类化合物。中国专利（申请号200410016891.6，公开日2005年9月14日）公开了冬凌草甲素在降解AML1-ETO融合蛋白中的应用，为开发具有t(8;21)染色体易位的白血病靶向治疗药物奠定了基础。另一中国专利（申请号201110413556.X，公开日2012年7月4日）公开了冬凌草甲素在制备FBW7抑癌蛋白激活剂中的应用，报道了冬凌草甲素通过激活FBW7介导的泛素化降解途径靶向降解癌蛋白c-Myc、cyclinE和mTOR的作用。关于冬凌草甲素在降解Bcr-Abl蛋白以及制备费城染色体阳性肿瘤治疗药物的应用还未见报道。

冬凌草甲素的化学结构式

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中的上述不足，提供一种靶向泛素化降解癌蛋白Bcr-Abl的方法和试剂，以及该方法在制备Ph阳性肿瘤治疗药物中的应用。

本发明的另一目的在于提出一种诱导剂，在临床和基础研究中用于降解Bcr-Abl蛋白，从而应用于其生物学功能及相关信号通路的研究。

申请人经大量研究发现冬凌草甲素在体内和体外均能够激活Bcr-Abl特异的泛素化降解途径，迅速和高效地降解Bcr-Abl癌蛋白，从而使Ph阳性的肿瘤细胞发生显著的生长抑制和不可逆转的细胞凋亡。

对本发明的研究结果进一步阐述如下：