[发明专利]一种全能花碱的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种全能花碱的制备方法，特别是涉及一种闪式提取全能花碱的方法。

背景技术

全能花碱（Pancratistatin），分子式C₁₄H₁₅NO₈，分子量325.27。全能花碱是从石蒜科全能花属植物滨生全能花Pancratium littorale Jacq.的鳞茎中提取分离的一种生物碱类化合物。实验研究表明，全能花碱具有：1.细胞毒活性。对鼠P388非常有效，其ED₅₀(体外)为0.01μg/ml；体内在0.75-12.5mg/kg时，延命率38%-106%，对鼠卵巢肉瘤M-5076也有效。2.抗RNA病毒活性。对感染乙脑小鼠注射本品后，存活率增加100%，对黄热病病毒和本雅病毒(bunyaviruses)也有效。3.植物生长抑制剂。抑制种子发芽和植物根的生长。4.抗肿瘤活性。最敏感为黑素瘤株，其次为脑、结肠、肺、肾肿瘤。

目前，国内尚未见全能花碱的提取纯化方法方面的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种全能花碱的制备方法，该方法工艺简单、快速、重现性好。易于产业化放大。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种全能花碱的制备方法，其特征在于包含以下步骤：

（1）取滨生全能花干燥鳞茎，用1%氨水浸泡2-6h，晾干，加入闪式提取器中，以85-95%乙醇溶液为提取溶剂，进行闪式提取，过滤得到提取液；

（2）上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集全能花碱流分，浓缩；

（3）将上述浓缩液采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集全能花碱组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，干燥即得产品。

所述步骤（1）中闪式提取电压为140-160V，提取时间为90s-120s。

所述步骤（2）中氧化铝为80-100目，氯仿-丙酮体积比为1:1，用量为柱体积的4-8倍。

所述步骤（3）中制备型液相色谱的流动相为乙腈-0.2%乙二胺水溶液，体积比为45：55，紫外检测波长为278nm。

本发明的特点是采用闪式提取、柱层析与制备型液相色谱法相结合技术制备全能花碱，高效节能，生产周期短，易于产业化。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

实施例1：

取滨生全能花干燥鳞茎200g，用1%氨水浸泡4h，晾干，加入闪式提取器中，以90%乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为140V，提取时间为90s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（100目）拌匀、干燥后装柱，用7倍柱体积的氯仿-丙酮（1:1）混合溶液洗脱，薄层检测，收集全能花碱流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈-0.2%乙二胺水溶液为流动相，体积比为45：55，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，控制流速为50ml/min，紫外在线检测，检测波长为278nm，收集目标成分，减压回收试剂得全能花碱42mg，经HPLC检测，纯度76.5%。

实施例2：

取滨生全能花干燥鳞茎500g，用1%氨水浸泡5h，晾干，加入闪式提取器中，以90%乙醇溶液为提取溶剂，提取电压为150V，提取时间为100s，进行闪式提取，过滤得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（100目）拌匀、干燥后装柱，用8倍柱体积的氯仿-丙酮（1:1）混合溶液洗脱，薄层检测，收集全能花碱流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45μm微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈-0.2%乙二胺水溶液为流动相，体积比为45：55，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10μm，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml，控制流速为50ml/min，紫外在线检测，检测波长为278nm，收集目标成分，减压回收试剂得全能花碱97mg，经HPLC检测，纯度79.4%。

实施例3：