[发明专利]除草剂2,4-D-杀虫剂CHI二联检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及环境激素检测技术领域，特别是涉及一种除草剂2,4-D-杀虫剂CHI二联检测卡及其制备方法。 

背景技术

近些年来，科学家们接连发现一些存在于生物机体之外，具有与人和生物内分泌激素作用类似的物质，这些物质能够模拟内分泌激素功能从而引起生物体内分泌系统紊乱，就将之称为环境激素或环境荷尔蒙。环境激素已成为继臭氧层、地球气候变暖之后全球的第三大环境问题，成为环境科学研究领域中的热门课题。 

环境激素是指外因性干扰生物体内分泌的化学物质。由于人类活动而释放到环境中的化学物质，在动物和人体内发挥类似雌激素的作用。它能通过与激素受体结合，干扰生物体正常的生理代谢、内分泌和生殖机能，引起种种负面的生物学效应。环境激素通过环境介质和食物链进入人或动物体内，干扰其内分泌系统和生殖功能系统，甚至有引发恶性肿瘤与生物绝种的危害。 

现代工农业生产在不断满足人类的生活需要的同时也给环境带来了沉重的负担，并且已经威胁到人类的生殖健康，甚至物种的繁衍。我国是世界上的农药生产与使用大国，资料显示2011年我国农药原药产量为264.87万吨，其中杀虫剂原药产量为70.9万吨，占总产量的44.35%；除草剂产量为117.5万吨，占总产量的26.77%；杀菌剂原药产量为15万吨，占总产量的5.67%。此类农药除部分出口外，大部分在国内销售和使用。据相关数据估算我国每年约有50~60万吨有机氯农药直接排放至环境中，如除草剂2,4-滴(2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid，2,4-D)、杀虫剂毒死蜱(Chlorpyrifos，CHI)及真菌剂五氯苯酚(Pentachlorophenol，PCP)。而多数有机氯农药具有较强的内分泌干扰作用。此类农药一旦进入环境就会通过多种暴露途径进入生物体内，富集于生物体的脂肪组织内进而危害人和动物的生殖健康。 

目前，环境激素污染物的分析方法主要分为以GC-MS、HPLC与LC-MS技术为代表的仪器分析方法以及基于抗原抗体反应的免疫分析方法，这些常规的残留分析方法通常操作程序复杂，效率较低，分析成本较高，不利于推广使用，难以适应大量样本和现场检测的要求。基于环境激素污染物的危害性、代表性及目前的研究热点，本发明涉及一种除草剂2,4-D和杀虫剂CHI二联检测卡及其制备方法。本发明的检测卡具有简便快捷、易于操作、成本低廉等优点，并且能同时检测水样中这两种环境激素污染物质，产生了良好的社会效益和经济效益。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种能同时检测水样中除草剂2,4-D和杀虫剂CHI的检测卡，适合进行现场检测且选择性好、稳定性强、简单方便、成本低廉的优点。 

本发明的除草剂2,4-D和杀虫剂CHI二联胶体金检测卡，由包被了2,4-D单克隆抗体、CHI单克隆抗体的胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了2,4-D蛋白质偶联物、CHI蛋白质偶联物和兔抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC背衬及塑料模具等组成，在PVC背衬的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。 

本发明的除草剂2,4-D和杀虫剂CHI二联胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现： 

(1)胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸（HAuCl₄·3H₂O）5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠（Na₃C₆H₅O₇·2H₂O）溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；

(2)抗体的预处理：将要标记的2,4-D或CHI单克隆抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS 稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS 将要标记的2,4-D或CHI单克隆抗体稀释成1 mg/mL，过0.22 μm滤膜；