[发明专利]除草剂2,4-D-杀虫剂CHI二联检测卡及其制备方法

权利要求书

1.除草剂2,4-D和杀虫剂CHI二联胶体金检测卡，其特征在于按照下述步骤制备得到：

胶体金溶液制备：取1 L 三角烧瓶1个，加入超纯水495 mL，而后加入1%氯金酸HAuCl₄·3H₂O 5 mL，配制成500 mL 0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠Na₃C₆H₅O₇·2H₂O溶液5-7 mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5 min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；

抗体的预处理：将要标记的2,4-D或CHI单克隆抗体在1000 r/min, 4℃条件下，离心20 min，取上清，用0.01 mol/L PBS 稀释成1 mg/mL；或者用0.01 mol/L PBS 将要标记的2,4-D或CHI单克隆抗体稀释成1 mg/mL，过0.22 μm滤膜；

胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40 mL，用0.25 mol/L K₂CO₃调节胶体金溶液pH至 8.5，电磁搅拌器250 r/min搅拌，逐滴加入4 mL 含0.3 mg 2,4-D或CHI单克隆抗体的蛋白溶液，反应10 min；逐滴加入4 mL 10% BSA，继续搅拌反应10 min；金标抗体溶液常温1500 r/min离心20 min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000 r/min 离心20 min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1 mL，制备成2,4-D单克隆抗体或CHI单克隆抗体的胶体金标记物；

胶体金膜的制备：将步骤(3)2,4-D单克隆抗体和CHI单克隆抗体的胶体金标记物依次用划膜仪以5 μL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3 h，制成含2,4-D单克隆抗体和CHI单克隆抗体的胶体金膜；

包被膜制备：将兔抗鼠IgG抗体稀释成1 mg/mL、2,4-D抗原稀释成0.3 mg/mL和CHI抗原稀释成0.5 mg/mL，用划膜仪依次以1 μL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2 h后，室温自然晾干或者37℃烘干；

样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；

检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水垫，组装成试纸条，切割成一定宽度长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。

2.根据权利要求1所述的除草剂2,4-D和杀虫剂CHI二联胶体金检测卡，其特征在于所述步骤(3)中的金标抗体稀释液由5 g小牛血清蛋白，10 g蔗糖，加100 mL 0.01 mol/L PBS溶液溶解配制而成，过0.22 μm滤膜，现配现用；金标抗体洗涤缓冲液是由10 g 小牛血清蛋白和1 g PEG-20000，用0.01 mol/L PBS pH7.4定容至100 mL所得；

所述步骤(6)中的样品垫处理液是由1 g小牛血清蛋白和0.8 g氯化钠，用含有0.5%TRITON-100的0.01 mol/L PBS定容至100 mL。