[发明专利]两面针组织培养培养基

说明书

技术领域

本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种两面针组织培养培养基。

背景技术

两面针（Zanthoxylum nitidum），为芸香科植物，因其叶片中脉两面均有小钩刺，故称“两面针”，又名两背针、钉板刺（福州）、入山虎、麻药藤、入地金牛、叶下穿针、红倒钩筋、大叶描爪簕(广东、广西)。两面针喜生长在温热、阳光充足的地方，山地、丘陵、平地的疏林、灌丛中、荒山草坡的有刺灌丛中较常见，主要分布在我国广东、广西、福建、海南、云南、贵州及台湾等地。两面针是我国较常用的一种中药材，根茎、叶、果皮均可入药，有活血、散瘀、镇痛、消肿等功效。现代药用化学研究表明：两面针的根茎含有生物碱oxynitidine，N-demethoxychelerythrone，dihydronitidine，skimmianine，6-ethoxychelerythrine，α-allocryptopine，nitidine等。局部应用时，对神经末梢有麻醉作用，且麻醉效果稳定，无不良反应，也无肝肾损害等，是一种具有广阔药用前景的中药材，因此开展两面针的基础研究，具有十分重要的意义。

目前，国内已有一些两面针组培技术初步研究报道，在培养基的选择上一般采用基本培养基（MS）和生长调节剂的结合，但是两面针种源产地不同，组织培养条件也不同，即使是同一产地的两面针种源，选用不同单株作外植体，组织培养条件也不同。MS培养基适用于部分产地两面针组织培养，部分产地两面针种源和两面针单株用MS培养基进行继代培养，先叶片变黄、变白，继而茎变黄、变白，芽苗死亡，无法继续进行继代培养。如果不同产地两面针种源、或两面针单株使用一种培养基，生产操作难度大，成本高，不利于规模化生产。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种两面针组织培养培养基，该培养基包括继代培养基和生根培养基，其中：

每升（L）继代培养基的组分及各组分的含量如下：

（1）大量元素：硝酸钾1250mg/L、硝酸铵1000mg/L、七水硫酸镁370mg/L、二水氯化钙166mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、乙二胺四乙酸二钠56.0mg/L、七水硫酸亚铁41.7mg/L；

（2）微量元素：四水硫酸锰25mg/L、七水硫酸锌10mg/L、硼酸10mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.083mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L；

（3）有机物：肌醇100.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素（VB₁）0.5mg/L、盐酸吡哆醇（VB₆）0.5mg/L、叶酸0.5mg/L、生物素（VH）0.05mg/L；

（4）植物生长调节剂：6-苄基腺嘌呤0.4～1.0mg/L、萘乙酸0.2～0.5mg/L；

余量为蒸馏水。

每升（L）生根培养基的组分及各组分的含量如下：

（1）大量元素：硝酸钾1250mg/L、硝酸铵1000mg/L、七水硫酸镁370mg/L、二水氯化钙166mg/L、磷酸二氢钾150mg/L、七水硫酸亚铁33.4mg/L、乙二胺四乙酸二钠44.8mg/L；

（2）微量元素：四水硫酸锰25mg/L、七水硫酸锌10mg/L、硼酸10mg/L、二水钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.083mg/L、五水硫酸铜0.025mg/L；

（3）有机物：肌醇100.0mg/L、甘氨酸2.0mg/L、盐酸硫胺素（VB₁）0.5mg/L、盐酸吡哆醇（VB₆）0.5mg/L、叶酸0.5mg/L、生物素（VH）0.05mg/L；

（4）植物生长调节剂：生根粉ABT6号0.4～0.8mg/L、萘乙酸0.2～0.4mg/L；

余量为蒸馏水。

本发明两面针组织培养培养基中的继代、生根培养基的配制方法为：

1母液配制

1.1为便于取样，宜先配制各种母液，分为大量元素母液、微量元素母液、有机物母液和各种植物生长调节剂母液。蔗糖、琼脂不宜配成母液，需要时直接称样；

1.2大量元素母液和有机物母液的各组分浓度应与培养基的组分浓度成10～100的倍数关系，微量元素母液成200～500的倍数关系，而植物生长调节试剂母液的浓度宜配成1mg/ml；

1.3母液选用无菌的蒸馏水、去离子水或超纯水配制，大量生产时用煮沸过的水；