[发明专利]糖尿病肾病早期诊断的血清代谢标志物测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及糖尿病肾病临床诊断标志物的测定方法，具体涉及采用气相色谱质谱及液相色谱质谱方法检测人血样中内源性小分子，采用相对定量或绝对定量方法测定糖尿病、糖尿病肾病病人血清中内源性小分子，与正常人血清内小分子含量范围进行比较，作为评判依据。

背景技术

长期以来，临床糖尿病肾病的诊断指标及方法主要包括尿白蛋白、血肌酐测定，这些指标在早期变化不明显，易出现假阳性结果。而肾组织活体虽然较为准确，但对人体伤害大，不能作为糖尿病肾病的常规筛查方法。具体不足主要体现在：

1.早期变化不明显临床规定尿白蛋白含量在20mg/L-200mg/L范围内，即属于微量白蛋白尿，超过200mg/L即属于肾脏重度损伤。大量研究表明，许多糖尿病肾病患者早期尿中白蛋白含量并未超标，当尿微量白蛋白超标时，患者肾脏纤维化已达到不可逆程度，从而错过治疗的最佳时段。

2.假阳性采用20mg/L做为临界值时，许多尿白蛋白阴性的健康人也会出现假阳性结果。这些假阳性结果往往是由于测试者体内缺水，尿液浓缩导致的，使得糖尿病肾病的患病率被高估。

3.伤害性由于微量白蛋白尿评判的不确定性，临床上经常将肾活检与之相结合。但活检对机体伤害性大，费用昂贵，病人顺应性差，不利于临床筛选。

总之，目前用于糖尿病肾病诊断的临床指标局限性大，缺乏一种安全可靠快速的测定方法，往往使糖尿病肾病病人错过治疗的最佳时期，造成疾病发展不可逆转的严重后果。

机体内源性小分子物质组是生命活动的基础，机体的功能状态必然反映在体内代谢组(内源性小分子化合物总称)上。研究表明，在疾病状态下机体代谢功能和很多小分子化合物水平明显异常。代谢组学可以对体内所有小分子代谢物进行定量分析，并寻找代谢物与生理病理变化的相对关系。利用合适的代谢组学检测工具，可以检测生物样本中数百甚至上千个分子量小于1000的各类小分子化合物。其中GC/TOFMS对很多化合物检测灵敏度高达10^-12mol(绝对检测限)，相对灵敏度达10^-9mol/mL，而HPLC/TOFMS的检测灵敏度则可达到10^-14mol。应用GC/TOFMS和HPLC/TOFMS，可以检测包括氨基酸、糖醇类化合物、脂肪酸类、脂类、小分子有机酸类、核苷和嘌呤化合物、氨类化合物、神经递质等各类内源性小分子代谢物。这类小分子物质是机体进行能量合成代谢分解的基础，当机体环境发生变化时，这些小分子代谢物的含量也随之改变。因此，检测的体内小分子的变化可以综合体现疾病早期体内微环境的变化。目前，没有利用代谢组学检测手段检测血清中分子预测早期糖尿病肾病发生的报道。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是：利用代谢组学的高通量检测及数据处理方法，鉴定并定量分析血清中小分子化合物，用于糖尿病肾病早期诊断。

为解决上述问题，本发明提供如下技术方案，步骤包括：

样品采集和处理：采集临床病人血清和健康人血清；按照1∶3(血清-甲醇)加入甲醇沉淀蛋白和提取，离心后取上清液处理后进样测定。

样品分析与测定：用于气相色谱-质谱检测的样品先进行干燥，随后衍生化处理后进样测定。用于液相色谱-质谱检测的样品可直接取离心后上清液处理后进样测定。

数据处理与处理与代谢标志物鉴定：对检测样品进行分析，发现并鉴定在正常组与疾病组之间有显著差异的化合物，采用上述方法进行定量检测。

本发明的有益效果：

1.通过检测糖尿病肾病早期诊断标志物可及时发现糖尿病人肾脏功能的早期异常，争取最佳治疗时机，防止糖尿病肾病出现不可逆转的变化。

2.与临床现有诊断方法相比，本方法测定血液中与代谢相关的分子，测定更加灵敏、特异性强，操作方便、对病人伤害性小，便于实施。

具体实施方式

本发明通过下面的实施例进行详细的解释，但并不意味着本发明仅限于此。

糖尿病肾病早期诊断的血清代谢标志物测定方法

1.实验方案和样品采集