[发明专利]糖尿病肾病早期诊断的血清代谢标志物测定方法

权利要求书

1.通过测定血清中代谢标志物用于糖尿病肾病早期临床诊断的方法，其特征包括以下几个方面：

a)采用人血清作为样本进行检测；

b)采用甲醇等溶剂对尿中小分子进行提取；

c)采用三甲基硅烷基三氟乙酰MSTFA的方法对尿样进行衍生化；

d)采用气相色谱-飞行时间质谱(GC/TOF-MS)、超高液相色谱-飞行时间质谱(UPLC/TOF-MS)进行样本分析；

e)应用SIMCAP-11软件和偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)建立数学模型；

f)从多维空间数学模型中提取参数，计算正常组和病理组之间相对距离。

g)利用仪器所检测的信号强度进行相对定量，或者利用标准品进行绝对定量。

2.除权利要求1中血清作为生物样本外，生物样本还可为血浆、全血，或来源于人的其它体液、组织、细胞等，具体包括尿液、红细胞、尿液、脑脊液、唾液、泪液、汗液、组织匀浆、细胞或细胞培养液。

3.权利1中得到的数据除可用于糖尿病肾病的诊断外，还包括用于诊断其它涉及肾脏损伤的疾病，如急性肾炎、尿毒症、慢性肾衰竭等相关疾病。

4.除权利要求1中甲醇沉淀蛋白的方法处理生物样本外，还包括不经过前处理的方法，或过滤/超滤的方法，或固相萃取方法，或经过高速离心和超速离心沉淀；或者生物样本采样其它蛋白沉淀方法，如加入有机溶剂(如乙醇、丙酮、乙腈、异丙醇)、各种酸碱盐沉淀、微波、加热沉淀的方法；或经过有机溶剂进行液-液提取，有机溶剂包括乙酸乙酯、氯仿、乙醚、正丁醇、石油醚、二氯甲烷、苯、正己烷、环己烷、乙腈等处理的方法。

5.除权利要求1中采用气相色谱-飞行时间质谱(GC/TOF-MS)、高效液相色谱-飞行时间质谱(LC/TOF-MS)进行样本分析外，还包括其它任何基于紫外检测、荧光检测、红外检测、氧化还原反应、免疫应答、电流变化等各种检测技术(如HPLC)、质谱测定技术(如LC/MS、LC/MS-MS、GC/MS、GC/MS-MS、CE/MS、CE/MS-MS)、核磁共振测定技术和其它代谢组学测定技术的分析方法，以及依据上述技术开发的单独的或者联用方法及试剂盒。

6.权利要求1中所得到的数据可以是绝对定量数据，也可以为相对定量数据、半定量数据，如峰面积、峰高，或采用数学方法对检测分子进行不同数学方式计算得到的数据，通过与健康人群的正常数值/置信区间以及糖尿病肾病早、中、晚期病人异常值/置信区间进行比较，从而对病人是否出现糖尿病肾病进行诊断。

7.除权利要求1中应用SIMCA P-11软件和偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)建立数学模型的方法外，还包括其它代谢组学数据处理软件，如SPSS、Matlab、SIMCA-P等各类版本；包括选择除偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)外的其它方法，如正交偏最小二乘法(OPLS)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)、主成分分析(PCA)、非线性映射(Nonlinemapping，NLM)、聚类分析(HCA)等方法建立数学模型。

8.权利要求1中的数学模型可以为任意维空间模型，这里的多维空间可以是1、2、3维，也可以是4、5、6甚至更多维空间。其空间距离的计算可以采用各种数学方法。