[发明专利]一种快速高效删除质粒上基因片段的方法无效
| 申请号： | 201210345247.8 | 申请日： | 2012-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN102899311A | 公开（公告）日： | 2013-01-30 |
| 发明（设计）人： | 周哲敏;杜坤;崔文璟;周丽;葛春蕾 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 高效 删除 质粒 基因 片段 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种一步PCR法删除质粒上基因片段的方法，是采用两个特异性引物片段，通过一步PCR实现删除质粒上任意位置基因片段的方法。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于两个特异性引物的设计，将与删除片段两端相连接的一定长度的序列拼接在一起，据此设计成为特异性引物。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，两个引物扩增方向相向。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，一步PCR法扩增得到目的片段已经被删除的质粒，不需要重叠PCR、酶切、连接等传统的构建方法。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR方法与普通PCR方法一致，但PCR延伸时间为延伸整个重组质粒长度的时间，一般含7000bp碱基数的重组质粒延伸时间约为5-8min。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，PCR方法与普通PCR方法一致，但PCR扩增循环数一般约为15-20次。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，PCR扩增完成后经DpnI酶消化3h后直接转化感受态细胞。
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