[发明专利]一种利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K2的方法

权利要求书

1.一种利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，它包括如下步骤：

（1）用纳豆芽孢杆菌BS-5突变体BS-53原生质体和纳豆芽孢杆菌CICC10262原生质体融合后筛选获得的高产菌株BKU-6；

（2）纳豆芽孢杆菌菌株BUK-6复合后，接种于20ml的种子培养液中进行恒温培养，再接种5%的活化培养基于100ml发酵培养基中进行发酵；

（3）发酵液中加入异丙醇和正已烷混合物处理，处理后进行离心处理，取上清液过滤；

（4）滤液经挥发后即可得到维生素K₂的油状物，经过真空冷冻干燥后即可得到黄褐色维生素K₂的成品。

2.如权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，所述纳豆芽孢杆菌BS-5是合肥工业大学食品学院微生物实验室提供的，所述纳豆芽孢杆菌CICC10262由中国微生物菌种保藏管理中心提供。

3.如权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，所述纳豆芽孢杆菌BS-5突变体BS-53原生质体和纳豆芽孢杆菌CICC10262原生质体之间采用电融合方式进行融合。

4.如权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，所述种子培养液为完全培养基，它包括如下质量百分比的组分：蛋白胨1%，葡萄糖0.5%，酵母粉0.5%，牛肉膏0.5%和NaCl 0.5%，余量为水。

5.如权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，所述恒温培养的温度为37℃，时间为12h。

6.如权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，所述发酵培养基包括如下质量百分比的组分：甘油5%，大豆提取物3%，酵母粉0.6g/L，K₂HPO₄ 0.3mol/L，CaCl₂·2H₂O 0.1g/L和MgS0₄·7H₂O 0.3g/L，余量为水。

7.如权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，所述发酵的温度为37℃，时间为4d。

8.如权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，所述异丙醇和正已烷混合物中异丙醇和正已烷的体积比为1：2，处理方式为在摇床上以220r/min的速度震荡10min，用于提取纳豆芽孢杆菌发酵液中的维生素K₂。

9.如权利要求1所述的利用纳豆芽孢杆菌生产维生素K₂的方法，其特征在于，所述离心处理的离心时间为15min，离心速率为8000rmp。