[发明专利]一种植生拉乌尔菌及其生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法

权利要求书

1.一种植生拉乌尔菌，该菌株名为Raoultella planticola VP4-4，保藏号为CCTCC M 2012005，植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M 2012005的生物学特征是：革兰氏阴性菌，能产酸、使牛奶液化并生成吲哚产生、赖氨酸脱羧酶实验呈阳性；鸟氨酸脱羧酶实验、H2S产生、明胶液化呈阴性；能以单糖，多糖、酯类和氨基酸为唯一碳源生长，其16SrRNA序列全长1408bp，其16S rRNA序列与Raoultella planticola的相似度达到99.563%。 

2.一种植生拉乌尔菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其步骤如下：

1）菌种活化：取植生拉乌尔菌Raoultella planticola VP4-4 CCTCC M 2012005接种到斜面培养基上，在25~38℃条件下，静置培养24~72h后得到活化菌种；

2）制备种子培养液：将步骤1）中所得的斜面培养物，接种到种子培养基，在25~38℃条件下，100~150rpm/min振荡培养24h~72h，连续转接1~3次，制得种子培养液；

3）发酵：将步骤2）中所得的种子培养液，按体积百分比2~20%的接种量接入发酵培养基，在32~40℃条件下，100~200rpm/min振荡培养24~72h；

4）转化：向步骤3）中所得的发酵液，加入2~10g/L的阿魏酸，在30~40℃条件下，100~200rpm/min振荡避光培养1~7天后停止；

5）将步骤4）中所得发酵液，在8000~120000rpm/min条件下，12~15min离心处理，收集上清液，得到淡黄色天然香兰素发酵液；所得到的天然香兰素发酵液浓度可达1.2~2.1g/L，转化率为15.12~27.15%。

3.根据权利要求2所述的一种植生拉乌尔菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于：所述步骤1）中，斜面培养基：麦芽汁：120mL，蔗糖：20g/L，琼脂：15g/L。

4.根据权利要求2所述的一种植生拉乌尔菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于：所述步骤2）中，种子培养基：麦芽糖：50g/L，蛋白胨：10g/L，氯化钠：5g/L。

5.根据权利要求2所述的一种植生拉乌尔菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于：所述步骤3）中，发酵培养基：碳源：5~20g/L，氮源：1~3g/L，KNO₃：1~3g/L，NaCl：0.5~1.5g/L，K₂HPO₄：0.5~1.5g/L，MgSO₄·7H₂O：0.5~1.5g/L，FeSO₄·7H₂O：0.01~0.05g/L，调节pH3~10。

6.根据权利要求5所述的一种植生拉乌尔菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于：所述碳源为淀粉、葡萄糖、蔗糖、D-果糖、麦芽糖、麦芽浸粉、麸皮和谷壳之中一种或多种。

7.根据权利要求6所述的一种植生拉乌尔菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于：所述碳源为麦芽浸粉。

8.根据权利要求5所述的一种植生拉乌尔菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于：所述氮源为豆粕、黄豆饼粉、牛肉膏、蛋白胨、酵母粉、大豆蛋白胨、硝酸钾、硫酸铵、硝酸铵和磷酸铵之中的一种或多种。

9.根据权利要求8所述的一种植生拉乌尔菌生物转化阿魏酸生产天然香兰素的方法，其特征在于：所述氮源为蛋白胨。