[发明专利]一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法

权利要求书

1.一种筛选中药药效相关成分的方法，其特征是，步骤如下：

（1）以所研究中药为对象，制备若干组化学成分浓度不同的供试品溶液；

（2）选择部分化学成分配制成不同浓度的溶液进行HPLC分析和/或将同一供试品溶液以不同浓度进行HPLC分析，测定其浓度和峰面积，并考察峰面积与对应成分浓度的线性关系；

（3）选择在浓度与峰面积的线性范围内的若干组供试品溶液，并测定各自的HPLC指纹图谱和对应药效指标；

（4）在与峰面积呈线性关系的浓度范围内，采用线性回归分析方法得到各成分的峰面积与药效指标之间的相互关系，根据各成分标准化回归系数和/或t检验结果的大小和正负确定药效相关成分对药效指标的作用，从而筛选出中药药效相关成分。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤（1）中通过对所研究中药的产地和/或提取工艺的变化来获得化学成分浓度不同的供试品溶液。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是，选择产地和/或提取工艺中不同因素和水平进行正交实验，得到若干组化学成分浓度不同的供试品溶液。

4.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤（2）中选择部分化学成分制成对照品溶液进行HPLC分析的方法是：选择部分化学成分配制成对照品混合溶液，并以该对照品混合液配制不同浓度的对照品溶液，然后进行HPLC分析，以各化学成分浓度为横坐标，以各成分对应的色谱峰面积为纵坐标，考察峰面积与对应成分浓度的线性关系，确定各成分浓度的线性范围。

5.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤（2）中将同一供试品溶液以不同浓度进行HPLC分析的方法是：将同一供试品溶液制成供试液，分别以不同的进样量进行HPLC分析，选择全部或部分共有峰，以色谱分析的进样量作为所选择的共有峰所代表的化学成分的浓度单位，并以该浓度单位作为横坐标，以该共有峰对应的色谱峰面积为纵坐标，考察峰面积与对应成分浓度的线性关系，确定各成分浓度的线性范围。

6.如权利要求1所述的方法，其特征是，它还包括取若干已知对照品进行HPLC分析，从而对所研究中药图谱对应色谱峰进行定性分析的步骤。

7.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤（4）还包括根据各成分与药效指标建立的数学表达式体现各成分对药效指标的综合作用，所述数学表达式为：药效是各成分的浓度与其标准化回归系数的乘积之和。

8.一种筛选中药药效相关成分的模型建立方法，其特征是，步骤如下：所述方法是通过以下步骤建立的：

（1）以所研究中药为对象，择取中药中所含多个已知的化学成分；

（2）将这些化学成分配制成对照品混合溶液，然后进行HPLC分析，以各化学成分浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，考察色谱峰面积与对应成分浓度的线性关系，确定各成分浓度的线性范围；

（3）将这些化学成分作为因素，在浓度线性范围内，采用正交试验设计将这些化学成分按不同浓度水平进行组合，得到各次试验样品；

（4）在25℃室温下，采用高效液相色谱仪采集上述各次试验样品的原始高效液相色谱指纹图谱；

（5）将上述所得的各次试验样品HPLC指纹图谱各色谱峰按照保留时间相近的原则进行色谱峰匹配；

（6）将上述取得的各次试验样品进行药理学实验，测定相应的药效指标；

（7）采用线性回归分析法将匹配后的各次试验样品HPLC指纹图谱色谱峰面积与对应药效指标进行建立线性回归数学模型，计算各个成分对应的标准化回归系数；

（8）根据各成分标准化回归系数的大小及统计检验结果确定与药效相关的成分；根据各成分标准化回归系数的正、负确定药效相关成分对药效指标的正向或负向作用；根据各成分浓度与其标准化回归系数的乘积之和体现各成分对药效指标的综合作用；

（9）对上述确定药效相关成分进行实验验证。