[发明专利]诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白、其制备方法和用途

权利要求书

1.一种诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种用于诊断细粒棘球蚴病的引物，其特征在于，其序列为：

上游：5'-GTAGAATTCATGTCCATCTTAAAGATCC-3'（如SEQ ID NO:3所示）或其互补链；

下游：5'-ATACTCGAGTTACAAAGGATTGCGGAAG-3'（如SEQ ID NO:4所示）或其互补链。

3.一种如权利要求1所述的诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）EgENO基因扩增，EgENO基因扩增的具体序列如SEQ ID NO:2所示；

2）重组质粒构建和鉴定，采用的重组质粒载体为：PET28a(+)；

3）重组蛋白的诱导表达及纯化。

4.如权利要求3所述的诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤1）具体为：设计SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的核苷酸序列或其互补链为引物，抽取细粒棘球蚴总RNA，反转录成cDNA，并以其为模板进行RT-PCR扩增。

5.如权利要求4所述的诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，所述RT-PCR扩增的反应条件为94℃预变性5min；94℃变性1min，55℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环；最后72℃延伸10min。

6.如权利要求3所述的诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤2）具体为：将步骤1）所得的PCR产物与表达载体PET28a(+)连接，转化大肠杆菌DH5α，筛选菌落、培养并提取质粒，双酶切鉴定并测序，将测序无误的重组表达质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）。

7.如权利要求3所述的诊断细粒棘球蚴病的重组抗原蛋白的制备方法，其特征在于，步骤3）具体为：将重组菌接种于含卡那霉素的LB液体培养基中培养，加入IPTG诱导表达，分别收集诱导前及不同诱导时间菌液，进行SDS-PAGE电泳分析；离心收集菌体，用纯化缓冲液重悬，冰浴，后冰上超声裂解，离心后分别取上清和沉淀进行可溶性分析；按纯化试剂盒纯化重组蛋白，测定吸光度计算蛋白浓度并用SDS-PAGE鉴定其纯度。

8.一种如权利要求1所述的重组抗原蛋白在制备诊断细粒棘球蚴病药物中的应用。

9.一种如权利要求1所述的重组抗原蛋白在制备细粒棘球蚴病诊断试剂盒中的应用。