[发明专利]PPAR α基因及用作为鹅脂肪沉积相关遗传标记的方法

说明书

技术领域

本发明涉及鹅的分子生物学技术及育种领域，具体是涉及测定与腹脂重、腹脂率相关特征的遗传标记的存在，更具体地说，是测定PPARα基因中的多态性，即与腹脂重和腹脂率相关的鹅过氧化物酶体增值物激活受体(PPAR)基因的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism，缩写为SNP)的存在。 

背景技术

现代家禽遗传育种理论和应用的发展，使肉用家禽特别是肉鸡、肉鸭的生长速度和饲料效率大幅度提高，生产效率与工厂化生产逐相适应。但同时也容易带来胴体腹部脂肪和皮下脂肪的大量沉积，导致饲料能量的浪费和胴体品质不佳。 

PPAR(Peroxisome Proliferators activated receptors)属于核激素受体超家族，它能够调控许多参与细胞内外脂类代谢的目的基因，还参与脂肪细胞分化。PPAR有三种亚型：α、β、γ。PPARα的目标基因是一组参与脂类分解的基因，能调控肝脏过氧化物酶体氧化；PPARγ参与脂肪细胞的分化及细胞内外脂类代谢相关目标基因的调控，影响脂肪酸在脂肪组织中贮存，对脂肪生成起作用，大部分PPARγ的目标基因直接参与脂肪合成途径，包括脂蛋白脂酶(LPL)、脂肪酸结合蛋白(FABP)、乙酰酰辅酶A合成酶和脂肪酸转运蛋白(FATP)。鸡PPARα基因的cDNA长593bp、CDS(mRNA反转录产物PCR的产物)为1407bp。孟和等对PPAR基因作为鸡脂肪性状候选基因的可能性做了研究，结果表明：用7对引物对AA肉鸡PPARα基因全编码区用PCR-SSCP方法进行扫描后发现引物4扩增片段上有一个C-T的单碱基突变，从而鸡群出现AA、 AB、BB三个基因型。BB基因型的腹脂重和腹脂率显著较高，从而推测PPARα基因可能是影响鸡脂肪代谢的主效基因或与主效基因连锁，可用于鸡脂肪性状的分子标记辅助选择。孟和等的研究结果表明：PPARα和PPARγ的不同基因型在地方鸡、蛋鸡、肉鸡中的频率存在差异；PPARα三种基因型与腹脂、腹脂率间极显著相关，其中BB型腹脂和腹脂率最高，AA型最低。PPARγ的三种基因型间不存在此类相关。用Northern杂交法可知PPARγ基因在鸡的脂肪组织和肾脏中高量表达。推测PPARα与脂肪代谢、沉积密切相关。解相林等报道，PPAR基因单核苷酸多态与脂肪性状存在显著相关，李春雨等研究表明，鸡的PPARγ基因SNPs在沉默突变的情况下仍然与腹脂重、腹脂率等存在显著关系，推测PPARγ基因可作为鸡体脂肪性状的主效基因。 

但是，目前有关鹅的DNA遗传标记、遗传多样性和相关功能基因的研究相对鸡来说还很少，且没有关于鹅PPARα基因的研究报道。 

发明内容

针对上述现有技术的不足，提供一种PPARα基因及其作为鹅脂肪性状遗传标记的用途；同时筛选与鹅脂肪性状相关的SNP，以期应用于标记辅助选择或标记辅助渗入，并提供上述遗传标记在鹅标记辅助选择中的应用。 

本发明实施例是这样实现的，一种PPARα基因，所述基因为与表示鹅脂肪性状指标的腹脂重、腹脂率相关的基因。 

进一步，所述基因PPARα序列的第175碱基处有一个碱基突变C175-G175。 

进一步，克隆PPARα基因所用引物的序列如下： 

正向引物：5′-CATTGGTGTTCGCAGCTGTT-3′， 

反向引物：5′-CAGAGCTCTCCTCACCGATG-3′。 

进一步，突变导致所编码的氨基酸发生改变，而且氨基酸高腹脂的为谷氨酸(E)，低腹脂的为谷氨酰胺(Q)。 

本发明实施例的另一目的在于提供一种用PPARα基因作为鹅脂肪沉积相关遗传标记的方法，该包括如下步骤： 

(1)根据GenBank中鸡PPARα基因的mRNA序列，用Primer 5.0设计引物，覆盖该基因部分编码序列，再获得鹅基因组DNA； 

(2)以上述鹅基因组DNA为模板，PCR扩增，产物纯化，克隆，获得如序列表SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列； 

(3)鉴定该基因序列的第175碱基处是否存在多态性。 

进一步，所述方法选择鹅作为研究对象，采用分子生物学的方法筛选鹅脂肪性状相关基因，其步骤如下： 

(1)选择相同日龄的健康雏苗溆浦鹅200只进行饲养试验； 

(2)根据PPARα基因的序列设计引物，对样品进行扩增、测序； 

(3)筛选与腹脂率高低相关的SNP。