[发明专利]一种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于水产养殖益生菌CW9的活菌干粉制剂，本发明还涉及该干粉制剂的制备方法。

背景技术

中国专利201010572426.6，公开号：CN 102485884A公开了一种节杆菌CW9及其用途，该菌可用于提高海水甲壳类幼体的变态率与存活率。对多种甲壳类动物幼体具有益生作用，其生产和储运方法简单，使用方法简便；该益生菌只在甲壳类动物蚤状一期投放，即可提高和稳定幼体后期的变态率，从而大幅度提高苗种产量。

现有技术中益生菌制剂的制备工艺较多，但都不适合甲壳类水产养殖动物幼体的使用。例如，有内服的益生菌制剂是固态发酵后单独或与饲料混合后干燥、粉碎，这样的产品颗粒太大，对于滤食的甲壳类水产养殖动物幼体，无法取食。或者是多种益生菌制成片剂泼洒到水体中，又或者更多的是用于调节水质。有的则是将发酵液直接包装成水剂，或离心后做成浓缩的水剂。无论哪种水剂，都不便于运输，且保藏周期短，保藏过程死亡率很高并且容易感染杂菌。实验室规模可以用以用冷冻干燥的方法生产菌剂，但冻干菌粉有很多不利，冻干耗时，价格昂贵，冷冻浓缩转化和储藏费用高，解冻过程菌种存货量减少。

水产养殖益生菌CW9已于2010年10月8日交中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)保藏，保藏编号为CGMCC NO.4197。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂及制备方法，可以有效提高活菌干粉制剂的存活率。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂：

以体积计的4份发酵液离心后去上清液，沉淀的菌泥加入1份保护剂，重新悬浮，喷雾干燥，得到水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂；

所述的保护剂按照以下质量比配制：

明胶0.1-0.2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份。

优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制：

明胶0.15份，脱脂奶粉25份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。

优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制：

明胶0.1份，脱脂奶粉25份，吐温-80 2份，司班-60 2份，水100份。

优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制：

明胶0.2份，脱脂奶粉20份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。

优化的方案中，所述的保护剂按照以下质量比配制：

明胶0.1份，脱脂奶粉30份，吐温-80 3份，司班-60 3份，水100份。

一种制备上述制剂的制备方法，包括以下步骤：

一、制备发酵液；

二、制备保护剂，所述的保护剂按照以下质量比配制：

明胶0.1-0.2份，脱脂奶粉20-30份，吐温-80 1-3份，司班-60 1-3份，水100份，保护剂的配制方法为搅拌混合；

三、以体积计的4份发酵液，7000rpm离心8min后去上清液，沉淀的菌泥加入1份保护剂，重新悬浮；

四、喷雾干燥，入口温度100℃，出口温度65℃，流量为300-400ml/h，收集喷雾干燥后的干粉菌剂；

通过上述步骤，得到水产养殖益生菌CW9活菌干粉制剂。

步骤一中，发酵培养基为葡萄糖8g/L，蛋白胨5g/L，酵母膏3g/L，氯化钠2g/L，pH7.0，115℃灭菌20min，种子培养基与发酵培养基相同；

扩大培养，用隔夜培养的斜面接种250ml摇瓶，内置100ml种子培养基，37℃，摇床180转/分钟，培养23小时；

发酵，接种量3％，通气比1∶0.8，搅拌转速300转/分钟，37℃，培养18小时。

步骤二中，优化的方案为，所述的保护剂按照以下质量比配制：

明胶0.15份，脱脂奶粉25份，吐温-80 3份，司班-60 2份，水100份。

干粉制剂活化时，干粉制剂与活化液质量体积比1∶10g/ml，活化液中糖的质量-体积浓度20-60g/L，活化温度32-42℃。

优化的方案中，干粉制剂活化时，干粉制剂与活化液质量体积比1∶10g/ml，即1克干粉制剂需要10毫升活化液进行活化，活化液中糖的质量-体积浓度为40g/L，活化温度37℃。