[发明专利]一个簇毛麦6VS染色体特异的分子标记6VS-SPB及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和遗传育种科学技术领域，具体涉及一个特异追踪簇毛麦6VS染色体的分子标记及其用法。

背景技术

小麦是全球三大粮食作物之一，也是我国总产第一的粮食作物，是保障我国粮食安全的重要决定因素之一。小麦在其生育进程中常会受到生物或非生物胁迫的影响。小麦白粉病是一种世界性小麦病害，近年来随着我国农田水利设施改善和水肥条件提高，其危害逐年加重。通过远缘杂交和染色体工程技术手段育成的小麦-簇毛麦T6AL.6VS易位系对目前已发现的白粉病生理小种均表现高抗或免疫，其抗白粉病基因Pm21位于簇毛麦6V染色体短臂上（6VS），是目前对小麦白粉病抗谱最广、抗性最强的基因。近年来T6AL.6VS易位系在小麦抗白粉病新品种选育中得到广泛利用，目前已育成20多个抗白粉病小麦新品种，推广面积超过5000万亩。

T6AL.6VS易位系是在普通小麦遗传背景中由簇毛麦6V染色体短臂（6VS）替换了普通小麦6A染色体的短臂（6AS），从而形成T6AL.6VS易位染色体。由于簇毛麦与普通小麦亲缘关系较远，导致二者不发生染色体重组，T6AL.6VS易位染色体始终以易位的形式出现在后代中。目前，未发现利用T6AL.6VS易位系培育的新品种或新品系中出现染色体易位形式的改变。因此，簇毛麦6VS控制的性状及其载有的DNA序列均以协同传递的方式出现在后代中。

目前，部分研究已公布了部分与6VS上抗白粉病基因Pm21连锁的相关分子标记OPT17₁₄₀₀、OPT17₁₉₀₀ 、SCAR₁₄₀₀、SCAR₁₂₆₅、NAU/XiBao15₉₀₂和NAU/XiBao16₁₅₈₆。但是，总体而言，这些标记在标记辅助选择育种中都存在不稳定的缺点，一个原因是由标记类型决定的，如RAPD标记OPT17₁₄₀₀和OPT17₁₉₀₀；其次是由于PCR反应体系和反应条件要求苛刻，PCR结果可重复性差造成的。这些缺点均不利于标记辅助选择技术在小麦育种实践中的应用。

EST（expressed sequence tag, 表达序列标签）是指从植物不同组织来源的cDNA文库中随机挑选克隆，对其5’和3’端进行测序获得的短cDNA序列。EST-STS（sequence-tagged site, STS）标记是直接依据已经定位于基因组物理图上的EST序列设计引物，对基因组或者cDNA进行扩增，从中寻找与目的基因连锁或具有染色体特异性的EST标记。由于EST-STS标记直接来源于表达基因序列，保守性较高，特别有利于界定物种之间的差异。因此，基于比较基因组学原理，利用普通小麦EST图谱，同样可以开发普通小麦亲缘物种簇毛麦特定染色体的特异性分子标记。

本发明就是基于上述思想指导下，利用比较基因组学原理，根据普通小麦bin-map图谱上第6部分同源群短臂上的EST序列设计以PCR技术为基础的EST-STS标记，筛选簇毛麦6V染色体短臂（6VS）特异性分子标记，用于快速检测和追踪普通小麦遗传背景中T6AL.6VS易位染色体及其控制的抗白粉病性状，为小麦抗白粉病分子标记辅助选择育种提供新型、实用、高效的分子标记。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异追踪簇毛麦6VS染色体的分子标记及其用法，它利用比较基因组学原理，根据普通小麦bin-map图谱上第6部分同源群短臂的EST序列，设计以PCR技术为基础的EST-STS标记引物，筛选簇毛麦6VS染色体特异性分子标记，为抗白粉病小麦-簇毛麦T6AL.6VS易位系在小麦抗白粉病新品种培育中的应用提供一种新型、实用、高效的分子标记辅助选择技术。

为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案：它是根据普通小麦bin-Map图谱第6部分同源群短臂的EST序列BE499423设计得到的，标记引物扩增出的一段约900bp的DNA条带位于簇毛麦6VS染色体，可以特异地追踪6VS染色体及其控制的抗小麦白粉病性状，标记引物序列为：

6VS-SPBF：5’-TCATGCTTTAGCTGAGTTTGACCAGA-3’ （SEQ ID NO.1），

6VS-SPBR：5’-GAACTTCCACAGCTTCTCATTTGAACAT-3’ （SEQ ID NO.2）。

本发明还公开了所述的簇毛麦6VS染色体特异的分子标记6VS-SPB在追踪小麦-簇毛麦T6AL.6VS易位染色体中的用途。