[发明专利]家兔血管内皮细胞RNA提取与纯化

权利要求书

1.一种家兔血管内皮细胞RNA提取方法，其特征在于包括如下步骤：

按无菌操作原则，打开家兔胸、腹腔，分离心脏、主动脉、髂动脉等大血管，剪断位于心脏上方的颈总动脉、上腔静脉肺静脉和肺动脉，家兔因血液流出过多而死亡，迅速手术操作，以便获取7种所需要的血管标本：左冠状动脉前降支、右冠状动脉、主动脉弓外环、主动脉弓内环、胸主动脉、腹主动脉、髂动脉；

左、右冠状动脉：将心脏一分为二，左半侧有左冠状动脉前降支，右半侧有右冠状动脉，在动脉开口处的下方，水平剪开，用吸头的顶部连接27#针头和注射器，将血管用PBS溶液冲洗3次，从冠状动脉的上部开口处，加入Trizol溶液，用无菌离心管收集流出物，置于冰上；

主动脉弓：将主动脉弯曲部分剪下，用PBS冲洗3次，去掉血块，从中线处剪开为外环和内环将内，外环放入培养皿中，顺着血管弯曲的走向分别加入Trizol溶液，冲洗3次，流出物分装入2个无菌离心管中，置于冰上；

胸、腹主动脉：隔肌以上为胸主动脉，隔肌以下为腹主动脉，分别用PBS冲洗3次，去掉血块，加入Trizol溶液冲洗2次，流出物分装入2个无菌离心管中，置于冰上；

髂动脉：从腹主动脉与髂动脉分叉处剪断，用PBS冲洗3次，去掉血块，加入Trizol溶液冲洗2次，流出物装入2个无菌离心管中，置于冰上；

在上述分离到的样品内分别加入氯仿，混匀，室温存放3-5分钟，2-6℃离心13-17min，上清液中加入等体积的75％乙醇，混匀后分别加入到质粒提取柱上，按质粒纯化步骤进行即得RNA。

2.根据权利要求1所述的提取方法，所述的家兔是麻醉后或新处死的家兔。 

3.根据权利要求1或2所述的提取方法，所述的纯化 RNA所采用的质粒纯化有关步骤包括：

将含有 RNA样品的纯化柱放在2ml收集管内，14000rpm、离心1分钟，弃去废液；加入PB液500μl，14000rpm、离心1分钟，弃去废液；加入PE液750μl，14000rpm、离心1分钟，弃去废液；然后空离14000rpm、1分钟以便除去残留的水分，弃去废液。将吸附柱移至干净的1.5ml离心管内，往吸附柱膜中央滴加30μl纯净水，室温静置1分钟，14000rpm、离心1分钟，收集到的洗脱液即为样品 RNA。