[发明专利]即食海产品中游离甲醛的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种即食海产品中游离甲醛的检测方法。

背景技术

即食海产品，如鱿鱼丝、鱼片、烤鳗干等海产小零食因味美、营养丰富而深受消费者欢迎，然而这类产品中甲醛含量往往较高，对产业发展造成了严重影响。有包括“鱿鱼及其制品加工贮存过程中甲醛的消长规律研究”《食品科学，2010，31（05）》、“Effect of processing steps on the physico-chemical properties of dried-seasoned squid”《Food Chem，2007，103（2）》和“鱿鱼及制品中甲醛来源与产生规律探索”《中国公共卫生管理，2007，22（3）》等文献报道显示，即食海产品中的甲醛并非一定为外源性添加，大多为内源性生成。因此，建立快速准确的检测方法对科学地评价此类产品中的甲醛有着重要的科学和现实意义。

传统的海产品中甲醛检测方法多为蒸馏法或水浸法，但这些方法检测的是产品中游离态和结合态甲醛的总量。而食品中对健康造成危害的仅为游离甲醛，因此游离甲醛的检测更有意义。为此，有“液相色谱法测定水产品中游离甲醛含量的研究”《浙江海洋学院学报，2006，25（4）》公开了通过采用三氯乙酸浸泡提取水产品中的游离甲醛对水产品中游离甲醛的检测方法。但由于三氯乙酸溶液为强酸性，所得提取液无法直接使用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）进行分析，只能使用分光光度法或通过二氯甲烷萃取等方法，转移至中性或弱酸性溶液中进行分析，操作略显繁琐。又有“高效液相色谱直接测定甲醛衍生物反应条件的研究”《分析化学，2004，32（11）》公开了一种在弱酸性条件下直接反应衍生甲醛的方法，反应产物可以直接使用HPLC进行分析。在此基础上，有“衍生液提取-高效液相色谱法快速测定香菇中的游离甲醛”《色谱，2010，28（10）》公开了对香菇中游离甲醛的快速测定方法。香菇和鱿鱼丝中的游离甲醛均来自前体物的分解，该方法通过降低提取溶液pH值、提高提取温度和控制提取液中乙腈浓度来抑制酶活性，从而达到测定游离甲醛的目的。鱿鱼等海产品中的甲醛来源虽然也是来自于前体物的分解，但是酶学途径并非是其主要的生成途径，温度也会促进甲醛的生成，并且是海产品内源性甲醛生成的重要来源。所以，对于即食海产品，不能简单地通过提高温度抑制酶活性的方法来抑制其中游离甲醛的生成。

此外，有中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1547-2011《进出口食品中甲醛含量测定 液相色谱法》规定了用液相色谱法对银鱼、香菇、面粉、奶粉、奶糖、奶油、乳饮品、啤酒等产品中甲醛含量的测定办法。主要过程是用衍生液提取试样中的甲醛，反应生成甲醛衍生物。甲醛衍生物经液液萃取净化后，在365nm波长处用液相色谱法（HPLC）测定，按外标法定量。对于固体类试样的具体过程是：

提取——称取粉碎均匀的样品2.0g，置于50mL具塞塑料离心管中，加衍生液20.0mL，涡旋混匀后置于60℃恒温振荡器中，150r/min振摇，间隔20min取出混匀一次，摇振1h后取出冷却至室温。

净化——以不低于4000r/min离心5。如离心后溶液浑浊或分层，在提取液中加入8g硫酸铵混匀，以不低于4000r/min离心5min。移取上清液于20mL具塞塑料离心管中，下层溶液用10mL乙腈重复萃取1次，合并上清液，用乙腈定容至20.0mL，混匀后过0.45μm微孔滤膜，得样本。

液相色谱条件——色谱柱： C₁₈柱，250mm×4.6mm（内径），5μm，或者相当者；流动相：甲醇-水（70+30，V₁+V₂）；流速：1.0 mL/min；柱温：40℃；检测波长：365nm；进样量：10μL。

其中：甲醛衍生物标准溶液——移取20μL、50μL、100μL、200μL、500μL甲醛标准溶液，置于10mL具塞比色管或刻度试管中，补加缓冲溶液至5.0mL再用2，4-二硝基苯肼溶液定容至10.0mL，盖上塞后混匀，60℃水溶加热1h，取出冷却至室温，过0.45μm微孔滤膜，得标准。

缓冲溶液（pH 5）——称取2.64g乙酸钠，以适量水溶解，加入1.0mL冰乙酸，用水定容至500mL。

2，4-二硝基苯肼溶液（0.6g/L）——称取2，4-二硝基苯肼300mg，用乙腈溶解定容至500mL。衍生液：量取100 mL缓冲溶液和100mL2，4-二硝基苯肼溶液，混匀。