[发明专利]荧光增白剂CBS-X检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种荧光增白剂CBS-X检测试剂盒，其特征在于，主要包括：

1）包被荧光增白剂CBS-X特异性抗原的酶标板：所述酶标板的每个微孔内荧光增白剂CBS-X特异性抗原的浓度为1-3μg/mL；

2）荧光增白剂CBS-X特异性抗体溶液：该荧光增白剂CBS-X特异性抗体的浓度为1-3μg/mL；

所述荧光增白剂CBS-X特异性抗原与荧光增白剂CBS-X特异性抗体溶液的用量比为1：1。

2.根据权利要求1所述的荧光增白剂CBS-X检测试剂盒，其特征在于，还包括有酶标二抗，所述酶标二抗是浓度按1:10000比例稀释的辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗。

3.根据权利要求1或2所述的荧光增白剂CBS-X检测试剂盒，其特征在于，所述荧光增白剂CBS-X特异性抗原的浓度为2μg/mL；所述荧光增白剂CBS-X特异性抗体的浓度为2μg/mL。

4.根据权利要求1所述的荧光增白剂CBS-X检测试剂盒，其特征在于，还包括荧光增白剂CBS-X标准品溶液、底物显色剂、洗涤液、终止液、封闭液和浓缩样品稀释液。

5.根据权利要求4所述的荧光增白剂CBS-X检测试剂盒，其特征在于，所述荧光增白剂CBS-X特异性抗体是鼠源单克隆抗体；所述荧光增白剂CBS-X特异性抗原为荧光增白剂CBS-X与载体蛋白的偶联物；所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、兔血清白蛋白、甲状腺球蛋白中的一种；所述荧光增白剂CBS-X标准品溶液浓度分别为1×10⁵μg/L、1×10⁴μg/L、1×10³μg/L、1×10²μg/L、1×10¹μg/L、1×10⁰μg/L；所述显色剂由显色剂A和显色剂B组成，所述显色剂A为过氧化氢或过氧化脲，所述显色剂B为邻苯二胺或四甲基联苯胺；所述终止液为1-2mol/L的硫酸溶液；所述洗涤液为含有0.05%-0.5%吐温-20的0.01M，pH7.4的磷酸盐缓冲液；所述封闭液为含5%脱脂奶粉的0.1M，pH7.4的磷酸盐缓冲液；所述浓缩样品稀释液为.01M，pH7.4的磷酸盐缓冲液；所述酶标板的材料为聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯中的一种。

6.一种荧光增白剂CBS-X检测试剂盒制备方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

1）制备包被荧光增白剂CBS-X特异性抗原的酶标板：将2-磺酸基苯甲醛、2-磺酸基-5羟基-苯甲醛和荧光增白剂CBS-X分散于干燥DMSO中，加入哌啶，微波加热，反应结束倒入水中，抽滤固体，得到带有酚羟基的荧光增白剂CBS-X衍生物；将带酚羟基的荧光增白剂CBS-X衍生物和碳酸钾分散于干燥DMF中，常温搅拌，加入N-(3-溴丙基)氨基甲酸叔丁酯，加热回流，荧光增白剂CBS-X的酚羟基被叔丁氧酰胺丙氧基所取代；随后将中间产物加入三氟乙酸中，回流搅拌，脱去叔丁氧酰基的保护，裸露出胺基，制得能够与蛋白质偶联的荧光增白剂CBS-X的半抗原；再将其与N-羟基丁二酰胺和碳二亚胺混合后反应，与载体蛋白偶联制备得到荧光增白剂CBS-X特异性抗原，将荧光增白剂CBS-X特异性抗原包被于酶标板中，所述酶标板的每个微孔内荧光增白剂CBS-X特异性抗原的浓度为1-3μg/mL；

2）制备荧光增白剂CBS-X特异性抗体：以步骤1)中合成的荧光增白剂CBS-X特异性抗原作为免疫原对小鼠进行免疫；免疫后，取血清效价高的小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合；采用有限稀释法筛选杂交瘤细胞，得到完全同质的单克隆抗体和稳定的单克隆杂交瘤细胞株；并取不完全佐剂腹腔注射进行致敏后的小鼠，将杂交瘤细胞混悬液注射到小鼠腹腔中，收集腹水，经辛酸-硫酸铵沉淀法进行腹水纯化，得到纯化的荧光增白剂CBS-X单克隆抗体；所述荧光增白剂CBS-X特异性抗体的浓度为1-3μg/mL。