[发明专利]一种水产品中氯霉素化学发光酶联免疫检测试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

一种氯霉素的化学发光酶联免疫分析试剂盒及其检测方法，属于化学发光免疫分析技术领域，用于水产品中氯霉素含量的检测。 

背景技术

氯霉素(Chloramphenicol，CAP)最初是由委内瑞拉链丝菌的培养基中提取制得，是一类广谱抗生素。氯霉素曾在我国畜牧业中广泛应用，对畜禽的疾病控制和治疗起到了重要作用。氯霉素存在着严重的毒副作用，能引起人的再生障碍性贫血，粒状白细胞缺乏症，新生儿、早产儿灰色综合症等，低浓度药物残留还会诱发致病菌的耐药性，对人类的健康构成巨大的潜在威胁。在美国仅允许氯霉素应用于非食用性动物，规定在任何动物性食品中不得检出氯霉素。欧共体禁止氯霉素应用于产奶牛和产蛋鸡，在其他动物性食品中的含量也做了限制，规定最高残留量为100ng/kg。中国农业部已将氯霉素从2002年版《中国兽药典》中删除列为禁药，近年已规定在动物性食品中不得检出。 

作为全国淡水渔业第一省的湖北水产业，续十三年淡水产品总量保持全国第一。我省现有水产加工企业180家，其中加工出口企业19家。作为国家明令禁止使用的兽药，在水产品等动物源性食品中，氯霉素残留一直被列为重点必检项目之一。 

目前，应用广泛的CAP检测技术有液相色谱法(LC)、质谱法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)等。LC等大型仪器分析方法对设备和操作者有较高要求，样品处理方法复杂，检测时间长。 

目前已申请的氯霉素检测相关专利中较多是采用传统的酶联免疫吸附法检测，如：江南大学申请号为02137940，名为《一种动物性食品中氯霉素酶联免疫检测试剂盒及其检测方法》；中国农业大学申请号为200410037254，名为《检测氯霉素的试剂盒》；中国农业大学申请号为200410037255，名为《一种检测氯霉素的试剂盒》；中国农业大学申请号为200410037258，名为《氯霉素的酶联免疫试剂盒》；中国农业大学申请号200410037259，名为《一种检测氯霉素的酶联免疫试剂盒》；北京望尔生物技术有限公司申请号200510086775，名为《一种检测动物性食品中氯霉素类药物的酶联免疫试剂盒》等。这一方法中常用的显色底物是四甲基联苯胺(TMB)或者邻苯二胺(OPD)，其中OPD具有致癌性，长期使用会对人体造成危害；且这类底物较不稳定易受外界干扰使最终测定结果受到影响，如光照或金属离子会使底物自身显色。酶联免疫吸附法是以酶催化底物显色，通常需显色10——60分钟，使显色达到平台期，显色完毕后需用酸终止显色测定结果。 

另外部分专利涉及到胶体金试纸法，如：博顿生物技术(杭州)有限公司申请号 200310109470，名为《检测氯霉素的免疫胶体金试纸及其制备方法》；云南大学申请号200610019376，名为《氯霉素胶体金检测试纸》等。该方法适操作简便，用时短用于大批量样品筛查，但灵敏度较低，结果不准确，易出现假阳性或假阴性。 

还有部分专利有采用液相色谱-串联质谱测定方法，如：上海徐汇区中心医院申请号200410067401，名为《一种蜂蜜中氯霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法》；中国人民共和国江苏出入境检验检疫局申请号200810195887，名为《蜂产品中多类农兽药残留同时检测的方法》，这类方法测定结果准确，但样品前处理过程繁琐，需要用大量有机溶剂，检测需要大规模仪器。 

此外还有天津生机集团股份有限公司申请号200810053150，名为《一种饲料或者兽药中违禁药物的快速检测方法》，该专利采用薄层色谱法检测违禁药物，这一方法操作简便，但样品处理过程中通常使用大量的有机溶剂，且检测结果只能定性判不能准确检测药物含量。江南大学申请号200910027458，名为《一种快速检测氯霉素的免疫磁珠层析试纸条及其制备方法》，采用免疫磁珠层析试纸条检测该方法与胶体金试纸法类似。江苏省原子医学研究所申请号200910182284，名为《一种氯霉素的光激化学发光免疫分析试剂盒》，采用光激化学发光免疫分析法，该方法需突破多次标记，即将CAP-OVA包被在发光微粒上，合成生物素二抗，将链霉亲和素包被在感光微粒上。本发明将具有高度灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，操作简便，用时短，无需长时间显色及终止，且灵敏度高，特异性好。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测氯霉素的化学发光酶联免疫检测试剂盒及其检测方法，用于水产品中氯霉素含量的检测。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。