[发明专利]一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及农业植物保护技术领域，尤其涉及一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法。

背景技术

香蕉枯萎病是分布于世界各主要香蕉产区的重要病害。由于香蕉枯萎病是典型的土传病害, 其防治非常困难, 应用抗病品种防治香蕉枯萎病是目前最经济有效的方法。

目前，我国普遍使用的香蕉枯萎病抗病种苗鉴定一般采用以土壤、细砂或基质为载体的盆栽接种的方法，如应用最广泛的盆栽灌根法和浸根后移栽法等，上述盆栽接种方法主要存在以下问题：1、由于土壤微生物的交互作用会影响试验结果的准确性，必须事先进行大规模的土壤消毒，操作不便，不利于抗病种苗的大量筛选；2、鉴定周期长，通常鉴定一次需要30天以上；3、种苗与土壤接触可能遭受其他土传病害的干扰，影响试验结果的准确性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的上述不足，提供一种通过在水培条件下对香蕉苗进行苗期接种，提高香蕉枯萎病育种的效率，同时为香蕉与病原菌互作机制、病原菌致病性分化、寄主抗性遗传、植物抗病机制、抗病种质资源筛选及抗病品种选育等研究提供便利的快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法。

本发明一种快速鉴定筛选香蕉枯萎病抗病种苗的方法，通过如下步骤实现：

（1）、建立香蕉苗水培系统

选取一定容积的水培容器，所述水培容器为水培箱、水培种植槽或水培池，水培容器内加入香蕉苗水培营养液，水培容器内嵌置有定植板，所述定植板为厚度2-3cm的轻质聚苯乙烯泡沫板，所述定植板上开设有若干直径为5-6 cm的开孔，开孔内匹配置放有培养杯，所述培养杯壁上开设有若干孔洞，所述培养杯内放置有香蕉苗；将培养杯置放于开孔内后，培养杯接触香蕉苗水培营养液深度为0.5-2.0cm，以避免香蕉苗整个球茎浸没入香蕉苗水培营养液中；所述水培容器通过管道连通有小型电动加氧泵，以用于提供香蕉苗水培营养液循环及加氧；电动加氧泵上设置有定时控制器，定时控制器控制电动加氧泵启动和关闭来调节香蕉苗水培营养液中含氧量。

（2）、接种体制备及接种

制备浓度为10⁵-10⁸cfu/ml的香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液作为接种体，选取叶龄为5-12叶期，株高为8-35cm的健康组培香蕉苗；采用伤根浸菌液法进行接种，将组培香蕉苗自苗床拨出，用自来水冲洗干净，再分别浸在配制好的香蕉枯萎病病原菌孢子悬浮液中，以清水作对照，浸泡30-60 min后，将接种后的香蕉苗放置于培养杯内，并进行固定，移栽到盛有香蕉苗水培营养液的水培容器中；所述香蕉枯萎病病原菌为尖孢镰孢菌古巴专化型（Fusarium oxysporum f. sp. cubense），包括4号生理小种（Foc4）、1号生理小种（Foc1）、2号生理小种或大蕉枯萎病菌等。

（3）、香蕉苗的日常管理

将接种后的香蕉苗置于温度为20~32℃、光照的环境中进行观察，光照提供方式可为自然光或人造光，保持水培容器内的香蕉苗水培营养液每小时通电加氧10-20min，并定期对香蕉苗水培营养液进行补充，记录植株的生长情况。

（4）、病情调查与分级

接种香蕉枯萎病病原菌大约10天后病症初显，开始按照病害评价等级对香蕉苗进行病害等级鉴定，记录香蕉苗的发病率及病情指数，每隔3-5天调查一次，共调查3-5次，根据发病率和病情指数判断植株抗病能力。

其中叶片病情调查方法为0级：无症状；1级：叶片黄化或萎蔫面积不超过叶片总面积的50%；2级：叶片黄化或萎蔫面积超过叶片总面积的50%；3级：叶片萎蔫或枯死，仅生长点存活；4级：整株枯死。

同时，如仅对香蕉品种抗性进行鉴定不需保留抗性的香蕉苗，在最后一次调查时同时切开球茎调查球茎危害状况。其中球茎内部症状病情调查方法为0级：球茎全部干净，维管束不变色；1级：球茎全部干净，维管束有零星小点变色；2级：维管束组织变色小于1/3；3级：维管束组织变色在1/3至2/3之间；4级：维管束组织变色大于2/3；5级：维管束组织全部变色。

本发明与现有技术比较具有以下有益效果：

（1）能直接观察不同发病时期香蕉苗根系及假茎、球茎的变化情况，为香蕉枯萎病病原菌侵染过程及寄主与病原互作机制等研究提供便利；

（2）可在较短时间内连续鉴定较大数量的组培香蕉苗，有利于大规模筛选香蕉枯萎病抗病种苗；

（3）经鉴定为具有抗性的香蕉苗可不伤根系移栽至田间继续生长；