[发明专利]滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法无效
| 申请号： | 201210277918.1 | 申请日： | 2012-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN102763641A | 公开（公告）日： | 2012-11-07 |
| 发明（设计）人： | 杨君兴;王晓爱;潘晓赋;陈小勇 | 申请（专利权）人： | 中国科学院昆明动物研究所 |
| 主分类号： | A01N1/02 | 分类号： | A01N1/02;C12N5/076 |
| 代理公司： | 昆明今威专利商标代理有限公司 53115 | 代理人： | 杨宏珍 |
| 地址： | 650223 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 滇池金线鲃 精子 超低温 冷冻 保存 复苏 方法 | ||
【权利要求书】：
1.、一种滇池金线鲃精子超低温冷冻保存及复苏方法，其特征在于该保存及复苏方法的具体步骤如下：
a.配子的采集：采精方法为轻压腹部法，选择形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的亲鱼原种或良种，用100 ppm的MS-222麻醉5 min，鱼类腹部用毛巾擦干，然后轻轻挤压腹部，成熟的精液自然流出到1.5 mL离心管中；
b.鲜精活力检测：先用移液器滴一滴水于载玻片上，对准视野，然后用针尖挑取上述精液立即于显微镜下搅拌，观察其活力，鲜精活力在85%以上的精液样品用于精子冷冻；
c.冷冻方法：将精液与抗冻液按1:2的体积比稀释后分装，经4℃平衡60 min，然后在液氮面上方6 cm处平衡2 min，液氮面上平衡2 min后投入液氮中保存；其中：抗冻液为稀释液D-15+7.5%乙二醇；
d. 复苏方法是将冻存管从液氮中取出后置于37℃水浴锅中快速晃动20 s。
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