[发明专利]基于纳米金模拟过氧化物酶的三聚氰胺测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及以纳米金为模拟过氧化物酶的三聚氰胺快速含量测定方法，属于分析化学和纳米技术领域。 

背景技术

可提供肉眼识别信号的比色法检测，具有简单，快速，适用于实时和现场检测等优点。基于纳米金的色度传感器近年来得到了广泛关注，其中的大部分均是基于纳米金聚集或聚集再分散过程中的等离子体耦合而产生的颜色变化。纳米金已越来越多地应用于比色法检测细胞、蛋白质、DNA、金属离子和小分子等。 

三聚氰胺（1,3,5-三嗪-2,4,6-三胺，C₃H₆N₆）是一种常见的化学物质，主要用于生产三聚氰胺甲醛树脂。由于其氮含量高（66.6％）、成本低，三聚氰胺常被非法添加入食物中，以在传统的凯氏或杜马斯法测定中产生蛋白质含量高的假象。长期膳食摄入过量三聚氰胺可导致婴儿和宠物的肾功能衰竭和死亡。因此，需要建立可以提供现场实时检测食品中三聚氰胺的可靠和高灵敏度方法。目前，三聚氰胺的检测方法主要包括高效液相色谱（HPLC）、液相色谱-质谱法（LC-MS）、气相色谱-质谱法（GC-MS）、串联质谱法（MS/ MS）、毛细管电泳法（CE）、化学发光法（CL）、红外光谱法（IR）、拉曼光谱法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、核磁共振法（NMR）等。然而，这些方法由于需要复杂的样品预处理过程，相对费时。此外，这些分析技术需要昂贵和先进的检测仪器，并由受过专业训练的人员操作，因此难以广泛应用。 

近来，1-（2-巯基）-1,3,5-三嗪-2,4,6-三酮、冠醚、3 -巯基-1-丙烷磺酸钠、核黄素、半胱胺、单链寡核苷酸修饰的纳米金均被作为显色探针用于原料奶和婴幼儿配方奶粉中三聚氰胺检测。这些方法大多表现出相当高的灵敏度，但纳米金复杂的修饰过程在一定程度上限制了它们的应用。在纳米金的形成过程中比色法检测三聚氰胺的技术也有报道，但非常费时。使用未改性的纳米金（实际上为柠檬酸覆盖的纳米金）作为显色探针已建立了更简单的三聚氰胺检测方法，但均灵敏度欠佳。 

本发明利用纳米金与三聚氰胺相互作用后其模拟过氧化物酶活性的变化，通过纳米金催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，提供了一种快速、简便、灵敏的三聚氰胺检测新方法。 

发明内容

本发明的目的是利用纳米金与三聚氰胺相互作用后其模拟过氧化物酶活性的变化，通过纳米金催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，提供了一种快速、简便、灵敏的三聚氰胺检测新方法。 

为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 

本发明所述的一种基于纳米金模拟过氧化物酶的三聚氰胺快速测定方法，包括如下步骤：利用纳米金与三聚氰胺相互作用后其模拟过氧化物酶活性的变化，通过纳米金催化过氧化氢氧化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐显色，根据溶液颜色和紫外吸收光谱特征的变化，来测定三聚氰胺浓度。

所述的基于纳米金模拟过氧化物酶的三聚氰胺快速测定方法，其特征是利用目视观察溶液颜色特征以判断三聚氰胺的浓度。 

所述的基于纳米金模拟过氧化物酶的三聚氰胺快速测定方法，其特征是利用吸光度值A₆₅₂以判断三聚氰胺的浓度。 

所述的基于纳米金模拟过氧化物酶的三聚氰胺快速测定方法，其特征是所使用的纳米金采用硼氢化钠还原氯金酸的方法制备，将500 μL浓度为 0.1 g/L 氯金酸水溶液用39.5毫升的水稀释，在剧烈搅拌下加入0.8毫升浓度为0.1 g/L的硼氢化钠水溶液，反应溶液颜色从浅黄色变成酒红色，暗处继续快速搅拌而形成纳米金。