[发明专利]检测维生素B12的酶联免疫试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测维生素B12的酶联免疫检测试剂盒，其特征在于包括有：

（1）包被有维生素B12偶联抗原的酶标板；

（2）维生素B12特异性抗体；

（3）酶标记抗抗体；

（4）维生素B12标准品溶液；

（5）底物显色液；

（6）终止液；

（7）浓缩洗涤液；

（8）复溶液。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述维生素B12偶联抗原是由维生素B12半抗原与载体蛋白偶联得到，所述维生素B12半抗原结构如下：

。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述维生素B12半抗原的制备方法主要包括如下步骤：

0.50g维生素B12、0.10g琥珀酸酐和1ml吡啶在20ml DMSO中的混合液，在80℃下搅拌反应40小时，蒸除溶剂，乙醇-水体系多次重结晶后得到邻苯二甲酸单维生素B12酯。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的维生素B12特异性抗体为维生素B12单克隆抗体。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述酶标记抗抗体的标记酶为辣根过氧化物酶；酶标记抗抗体是采用过碘酸钠法将标记酶与抗抗体偶联得到。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的终止液为1~2mol/L的硫酸或盐酸溶液，所述底物显色液由底物液A液和底物液B液组成，所述底物液A液为过氧化脲溶液，底物液B液为四甲基联苯胺溶液。

7.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所用包被缓冲液为pH9.0~9.6，0.1~0.2mol/L碳酸盐缓冲液，所用封闭液为pH7.2~7.6，0.1mol/L磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量百分比。

8.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的浓缩洗涤液为pH7.2~7.6，含0.5%~1.0%吐温-20和0.01‰~0.05‰的叠氮化钠防腐剂的0.1~0.2mol/L的磷酸盐缓冲液，所述的复溶液为pH值为7.0~7.2，含有5%~10%酪蛋白、0.02mol/L的磷酸盐缓冲液，所述百分比为重量百分比。

9.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述维生素B12标准品溶液浓度分别为0μg/L、0.2μg/L、0.6μg/L、1.8μg/L、5.4μg/L。

10.一种检测样品中维生素B12含量的方法，主要步骤包括：

1）将待测样品进行前处理；

2）用权利要求1-9任一项所述的酶联免疫试剂盒进行检测；

3）分析检测结果。