[发明专利]凝固酶原以及使用所述酶检测内毒素或(1→3)-β-D-葡聚糖的方法

权利要求书

1.编码鲎来源的凝固酶原的核酸。

2.权利要求1所述的核酸，其中所述鲎选自中国鲎（Tachypleus tridentatus）、美洲鲎（Limulus Polyphemus）、马来鲎（Tachypleus gigas）和圆尾鲎（Tachypleus rotundicauda）。

3.权利要求1所述的核酸，其中所述编码鲎来源的凝固酶原的核酸选自以下（A）～（C）：

（A）编码含有序列号4所示氨基酸序列的蛋白质的DNA、

（B）编码“含有序列号4所示氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、取代、插入或移位了的氨基酸序列且具有鲎来源的凝固酶原活性的蛋白质”的DNA、

（C）由上述（A）或（B）的DNA转录得到的RNA。

4.权利要求1所述的核酸，其中所述编码鲎来源的凝固酶原的核酸选自以下（a）～（c）：

（a）含有序列号3的碱基序列1～1143所示的碱基序列的DNA、

（b）具有下述特征的DNA：在含有序列号3的碱基序列1～1143所示的碱基序列的碱基序列上，具有使由所述碱基序列编码的蛋白质的氨基酸序列中1个或多个氨基酸缺失、取代、插入或移位的碱基变异，且所表达的蛋白质具有鲎来源的凝固酶原活性，

（c）由上述（a）或（b）的DNA转录得到的RNA。

5.带有权利要求1～4中任一项所述的核酸的病毒。

6.权利要求5所述的病毒，其中所述病毒为杆状病毒。

7.权利要求6所述的病毒，其中所述杆状病毒为核型多角体病毒。

8.携带权利要求5～7中任一项所述的病毒的细胞。

9.权利要求8的细胞，其中所述细胞为昆虫来源的细胞。

10.制备鲎来源的凝固酶原的方法，其至少包括使权利要求8或9所述的细胞生长，并从其生长物中回收鲎来源的凝固酶原的步骤。

11.根据权利要求10的方法制备的凝固酶原。

12.内毒素检测方法，其特征在于：使待检测内毒素的被检样品与权利要求11所述的凝固酶原和“表现出通过与内毒素接触使凝固酶原转化为凝固酶的活性的丝氨酸蛋白酶前体”共存，以伴随凝固酶原转化为凝固酶的酶活性作为指标，对所述样品中的内毒素进行检测。

13.权利要求12所述的内毒素检测方法，其特征在于：“表现出通过与内毒素接触使凝固酶原转化为凝固酶的活性的丝氨酸蛋白酶前体”是“表现出通过与活性C因子接触使凝固酶原转化为凝固酶的活性的丝氨酸蛋白酶前体”和鲎来源的C因子和/或重组C因子。

14.权利要求13所述的内毒素检测方法，其特征在于：“表现出通过与活性C因子接触使凝固酶原转化为凝固酶的活性的丝氨酸蛋白酶前体”是鲎来源的B因子和/或重组B因子。

15.权利要求12～14中任一项所述的内毒素检测方法，其特征在于：仅使作为级联反应蛋白质的权利要求11所述的凝固酶原、重组C因子和重组B因子共存。

16.用于实施权利要求12所述的检测方法的内毒素检测试剂盒，其特征在于：其组分至少含有权利要求11的凝固酶原和“表现出通过与内毒素接触使凝固酶原转化为凝固酶的活性的丝氨酸蛋白酶前体”。

17.权利要求16所述的内毒素检测试剂盒，其特征在于：“表现出通过与内毒素接触使凝固酶原转化为凝固酶的活性的丝氨酸蛋白酶前体”是“表现出通过与活性C因子接触使凝固酶原转化为凝固酶的活性的丝氨酸蛋白酶前体”和鲎来源的C因子和/或重组C因子。

18.权利要求17所述的内毒素检测试剂盒，其特征在于：“表现出通过与活性C因子接触使凝固酶原转化为凝固酶的活性的丝氨酸蛋白酶前体”是鲎来源的B因子和/或重组B因子。

19.权利要求16～18中任一项所述的内毒素检测试剂盒，其特征在于：其组分仅含有作为级联反应蛋白质的权利要求11所述的凝固酶原、重组C因子和重组B因子。