[发明专利]一株不动杆菌及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术，具体涉及一株不动杆菌及其构建方法和应用。 

背景技术

水体富营养化已成为困扰世界各国的普遍性环境问题。浮游藻类的大量繁殖导致水华的频繁爆发，严重影响了人类的生活、生产和身体健康，造成了世界范围内的生态灾害，探索控制水华发生的有效途径已迫在眉睫。目前治理水体富营养化主要是采用物理和化学方法，但这两种方法不仅会消耗大量的财力和物力，而且会在一定程度上破坏生态环境。溶藻菌作为水华和赤潮的防治生物，日益受到国内外环境工作者的广泛关注。国外对溶藻菌的研究已有数十年的历史，自Geitler报道一种寄生在刚毛藻上的粘细菌以来，陆续有溶藻菌的相关报道，研究重点也逐渐从单一溶藻菌的筛选及溶藻特性研究过渡到菌---藻种群生态学及分子调控机理等方面。目前，国内对溶藻细菌的研究还处于初始阶段，因此，寻找高效溶藻菌对溶藻菌的深入研究及应用具有重要意义。 

水华鱼腥藻是导致水体富营养化的主要藻种之一，分布广，能够产生藻毒素，直接和间接危害人类，然截止目前，利用微生物方式控制水华鱼腥藻的研究甚是罕见。为此，本发明通过分离纯化高效溶藻菌株，探讨该溶藻菌株对水华鱼腥藻的生长效应和光合色素的影响，对于安全、经济、高效的控制水体富营养化、治理水华具有重要的科学实践价值。 

发明内容

本发明的目的之一是提供一种不动杆菌；本发明的目的之二是提供一种利用微生物去除水华鱼腥藻(引起水华的常见藻类)的方法，以消除当前水华中水华鱼腥藻的大量繁殖带来的环境污染问题。 

本发明中的不动杆菌从农业部都市农业(南方)重点实验室黄化的水华鱼腥藻 液中分离筛选并获得，已于2012年6月6日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。保藏编号为CGMCC No.6196。其分类命名为：不动杆菌，拉丁名：Acinetobacter sp.。 

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：一株不动杆菌，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，命名为Acinetobacter SSAL-8。 

上述不动杆菌的构建方法，包括以下步骤： 

A、以黄化的水华鱼腥藻液作为溶藻细菌的分离源，采用涂布平板法及分区划线法多次纯化分离得到25株溶藻细菌； 

B、将分离获得的25株溶藻细菌分别置于100mL LB液体培养基中，在180r·min^-1、37℃下培养24h； 

C、将经过培养的25株溶藻细菌分别取800μL滴加到水华鱼腥藻固体平板上，通过溶藻斑的大小考察、比较各菌的溶藻效果，最终筛选出具有较高溶藻效应的菌株SSAL-8，经鉴定为芽孢杆菌，命名为Acinetobacter SSAL-8； 

D、将菌株Acinetobacter SSAL-8接入斜面培养基，于4℃扩大培养制成菌悬液； 

E、将菌悬液加入到灭菌的甘油中，甘油的最终浓度为25％，放入-80℃的冰箱保藏。 

上述的不动杆菌的构建方法，其中，所述的LB液体培养基的组分及含量为：酵母提取物，5g；胰蛋白胨，10g；NaCl，10g；蒸馏水1000mL；pH7.0-7.2。 

上述的不动杆菌的构建方法，其中，所述的斜面培养基的组分及含量为：磷酸氢二钾(K₂HPO₄)，0.075g；硫酸镁(MgSO₄·H₂O)，0.125g；碳酸钙(CaCO₃)，0.100g；柠檬酸铁(1％水溶液)，0.5mL；柠檬酸(1％水溶液)，0.5mL；钼酸(1％水溶液)，5滴；氢氧化钠(1％水溶液)，1.5mL；琼脂粉，15g；蒸馏水，1000mL。 

上述不动杆菌用于降解水华鱼腥藻，其降解效果随菌株浓度的增大而增加，当菌株的浓度为35％时，对水华鱼腥藻叶绿素a的抑制率达91％。 

附图说明

图1为不动杆菌Acinetobacter SSAL-8对水华鱼腥藻细胞数的影响； 

图2为不动杆菌Acinetobacter SSAL-8对水华鱼腥藻干重的影响； 

图3为不动杆菌Acinetobacter SSAL-8对水华鱼腥藻色素吸收光谱的影响； 

图4为不动杆菌Acinetobacter SSAL-8对水华鱼腥藻叶绿素a的影响。 

具体实施方式