[发明专利]一种脂蛋白(a)检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人脂蛋白(a)的检测试剂盒。

背景技术

脂蛋白(a)是一种富含胆固醇的脂蛋白，核心部分为中性脂质和apoB-100分子，其外围包绕着亲水性的apo(a)，二者以二硫键共价连接；其中apo(a) 是脂蛋白(a)的特征性糖蛋白成分，主要由一种称为Kringle的特征性结构构成，Kringle由80～114个氨基酸残基组成，依靠三个内部二硫键稳定。

脂蛋白(a)主要在肝脏合成后分泌入血，血浆脂蛋白(a)浓度主要取决于脂蛋白(a)的合成速率，而与分解速率基本无关。 

研究表明血栓闭塞性脉管炎病人，发现其血浆中脂蛋白(a)浓度均升高。认为脂蛋白(a)增强了ICAM-1的mRNA的表达以及ICAM-1在细胞表面的表达，从而促进白细胞（特别是单核细胞）对血管内皮的粘附性及向血管内皮的转移，在动脉粥样硬化的早期和炎性心血管疾病两方面均起重要作用。此外，研究认为，高水平血清脂蛋白(a)浓度作为脑血管疾病的危险因素，不仅与其致动脉硬化和抗纤溶作用有关，而且可能与其降低红细胞膜脂流动性和变形性有关。 

脂蛋白(a)能够影响肾小球的血流动力学，加速肾脏疾病的进展。许多肾脏疾病肾小球内脂蛋白(a)的沉积，且沉积的程度与肾小球硬化的程度相关。至于脂蛋白(a)是如何沉积的却未明确。作为一个具有脂质毒性的脂蛋白，脂蛋白(a)在肾小球硬化中应用具有一定的致病作用。 

在糖尿病患者中发现脂蛋白(a)血清水平明显高于一般人群，脂蛋白(a)水平的升高是糖尿病并发微血管病变、冠心病的一个重要因素，其作用方式与脂蛋白(a)致动脉粥样硬化相似。也有报道，2型糖尿病患者血清脂蛋白(a)的升高可能通过激活血小板活化途径参与糖尿病血管病变的发生及发展。另外，在肝病患者如原发胆汁性肝硬化患者中未发现有脂蛋白(a)浓度的改变。在子宫内膜异位的女性患者中发现有脂蛋白(a)水平升高，研究表明性激素对脂蛋白(a)血清浓度有影响。

目前已知的测定脂蛋白(a)的方法有放射免疫测定法、荧光免疫测定法、时间分辨荧光免疫测定法、酶联免疫测定法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验。

发明内容

本发明的目的是提供一种脂蛋白(a)的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。

本发明的另一目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。

为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为：

试剂R1：缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；

试剂R2：缓冲液、结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。

本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下：

（a）按下列比例配制好试剂：

试剂R1：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

聚乙二醇        5-10 mmol/L

叠氮钠          1-5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L；

试剂R2：

Tris缓冲液      200-220mmol/L

结合有脂蛋白(a)单克隆抗体的乳胶粒子   3.5-5%（v/v）

吐温-20         1-5mmol/L

叠氮钠          0.5-3 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  1-5mmol/L

牛血清白蛋白    1-5mmol/L

（b）将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；

（c）用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；

（d）根据吸光度变化值计算出样本中脂蛋白(a)的浓度。

具体实施方式

下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。

实施例1：

本发明的试剂盒举例是双试剂，其中：

试剂R1：

Tris缓冲液      200mmol/L

聚乙二醇        8 mmol/L

叠氮钠          5 mmol/L

乙二胺四乙酸钠  5mmol/L

牛血清白蛋白    5mmol/L；

试剂R2：