[发明专利]一种高通量的环境污染物检测方法

说明书

技术领域

本发明属于环境领域中污染物的高通量测定，具体的说是一种高通量的环境污染物检测方法。

背景技术

由于水环境中的污染物存在种类多、含量低、样品基质干扰严重等问题，污染物的检测方法建立及仪器研发是环境监测和研究中的重要技术环节。目前，水中污染的测定多经过现场采样、保鲜运输、实验室进行萃取-净化-浓缩富集-仪器测定等一系列的环节。虽然，常用的萃取-净化-富集浓缩处理方法能够在实际应用取得良好的效果，但均需一定量的有机溶剂，造成环境污染；液相色谱、气相色谱、色质谱联用仪等大型仪器，虽然能够获得高灵敏度、准确的测试结果，但难以解决水样易污染、易降解、保存和运输条件严格等问题。近年来，市场上先后出现了一些水中污染物速测的小型仪器，利用常规有机物对紫外光的吸收原理，可在现场进行水质TOC、COD、BOD及部分重金属离子的测定，但无法对水中各种微量污染物进行定性定量，不能满足水中不同种类污染检测。

发明内容

本发明目的在于提供一种分子印迹结合流式细胞技术的高通量环境污染物的检测方法。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种高通量的环境污染物检测方法，将带有待测物分子印迹孔穴的荧光标记微球加入待测水样中，使其通过流式细胞仪的流动室，形成单微球的液柱通至激光测量区，测量区的微球被激光照射后，产生待测物的正向、侧向散射光和微球荧光标记物的激发荧光，激发荧光透过滤光片转化为电信号，通过对微球的染色荧光和待测物散射光转化电信号，对待测物进行定性定量的测定。即，由光信号波长特性及在特征波长下的微球计数结果共同对微球定性。由光信号强度和流式细胞仪的微球计数统计结果对待测物定量。

所述带有待测物分子印迹孔穴的荧光标记微球的制备为：

1）均相体系制备1-10μm聚苯乙烯微球；

2）聚苯乙烯微球荧光染色；

3）将染色聚苯乙烯微球于微乳液中溶胀，而后于溶胀体系中加入待测物模板分子、功能单体、引发剂和分散液在微球表面进行聚合，形成带有待测物分子印迹孔穴的荧光标记微球。

所述步骤1）均相体系制备1-10μm聚苯乙烯微球:

无水乙醇与分散剂混合形成均相体系，而后在均相体系中加入引发剂和单体苯乙烯在40-80℃温度的条件聚合反应10-15小时；得1-10μm聚苯乙烯微球；所述按重量份数计反应体系中，每100份苯乙烯单体，加入200-700份无水乙醇，5-15份分散剂和1-3份引发剂。

所述分散剂为聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇；引发剂为偶氮类引发剂或过氧化引发剂。

所述偶氮类引发剂偶氮二异丁腈或偶氮二异庚腈，过氧化引发剂为过氧化苯甲酰。

所述步骤2）聚苯乙烯微球表面荧光染色，将所得聚苯乙烯微球与有机溶剂混合溶剂、吐温20和染色剂混合超声分散10min-20min，分散后室温下静止放置使有机混合溶剂挥发，挥发后采用小分子量的醇类溶剂洗涤微球后离心，弃去上清液，得到染色聚苯乙烯微球。

所述有机混合溶剂为氯仿和异丙醇；染色剂为罗丹明101和吖啶橙；小分子量的醇类为甲醇、乙醇或丙醇。

按重量份数计，1份聚苯乙烯微球添加30-60份有机混合溶剂、0.3-1份吐温20和0.01-1份染色剂；其中有机混合溶剂为氯仿和异丙醇，二者的混合按重量份数计比例为99:1-50:50；染色剂为罗丹明101和吖啶橙，二者的混合按重量份数计比例为0:100-100:0。

将邻苯二甲酸酯和十二烷基磺酸钠以及蒸馏水通过超声处理制成微乳液，将微乳液和上述染色聚苯乙烯微球分散液混合，于室温下440-900rpm转速搅拌溶胀10-17小时，再加入偶氮二异庚腈、甲苯、水和聚乙烯醇水溶液并在室温下，以440-900rpm转速搅拌溶胀反应1-4小时；最后向溶胀体系中加入模板分子、功能单体、分散液水和聚乙烯醇水溶液在室温下，以440-900rpm转速搅拌反应1-4小时，在40-70℃下，向体系通氮气于微球表面进行聚合聚合反应18-30小时，形成分子印迹键合染色的聚苯乙烯微球。

所述微乳液按重量份数计，由1份染色的聚苯乙烯微球分散水液、1-3份邻苯二甲酸二丁基酯、0.1-0.17份十二烷基磺酸钠和50-70份蒸馏水混合制成，其中染色的聚苯乙烯微球分散水液浓度为0.1-0.4g/ml；