[发明专利]一种高通量的环境污染物检测方法

权利要求书

1.一种高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：将带有待测物分子印迹孔穴的荧光标记微球加入待测水样中，使其通过流式细胞仪的流动室，形成单微球的液柱流通至激光测量区，测量区的微球被激光照射后，产生待测物的正向、侧向散射光和微球荧光标记物的激发荧光，激发荧光透过滤光片转化为电信号，通过对微球的染色荧光和待测物散射光转化电信号，对待测物进行定性定量的测定。

2.按权利要求1所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：所述带有待测物分子印迹孔穴的荧光标记微球的制备为：

1）均相体系制备1-10μm聚苯乙烯微球；

2）聚苯乙烯微球荧光染色；

3）将染色聚苯乙烯微球于微乳液中溶胀，而后于溶胀体系中加入待测物模板分子、功能单体、引发剂和分散液在微球表面进行聚合，形成带有待测物分子印迹孔穴的荧光标记微球。

3.按权利要求2所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：所述步骤1）均相体系制备1-10μm聚苯乙烯微球:无水乙醇与分散剂混合形成均相体系，而后在均相体系中加入引发剂和单体苯乙烯在40-80℃温度的条件聚合反应10-15小时；得1-10μm聚苯乙烯微球；所述按重量份数计反应体系中，每100份苯乙烯单体，加入200-700份无水乙醇，5-15份分散剂和1-3份引发剂。

4.按权利要求3所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：所述分散剂为聚乙烯吡咯烷酮或聚乙烯醇；引发剂为偶氮类引发剂或过氧化引发剂。

5.按权利要求3所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：所述偶氮类引发剂偶氮二异丁腈或偶氮二异庚腈，过氧化引发剂为过氧化苯甲酰。

6.按权利要求2所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：所述步骤2）聚苯乙烯微球表面荧光染色，将所得聚苯乙烯微球与有机溶剂混合溶剂、吐温20和染色剂混合超声分散10min-20min，分散后室温下静止放置使有机混合溶剂挥发，挥发后采用小分子量的醇类溶剂洗涤微球后离心，弃去上清液，得到染色聚苯乙烯微球。

7.按权利要求6所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：所述有机混合溶剂为氯仿和异丙醇；染色剂为罗丹明101和吖啶橙；小分子量的醇类为甲醇、乙醇或丙醇。

8.按权利要求6或7所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：按重量份数计，1份聚苯乙烯微球添加30-60份有机混合溶剂、0.3-1份吐温20和0.01-1份染色剂；其中有机混合溶剂为氯仿和异丙醇，二者的混合按重量份数计比例为99:1-50:50；染色剂为罗丹明101和吖啶橙，二者的混合按重量份数计比例为0:100-100:0。

9.按权利要求3所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：将邻苯二甲酸酯和十二烷基磺酸钠以及蒸馏水通过超声处理制成微乳液，将微乳液和上述染色聚苯乙烯微球分散液混合，于室温下440-900rpm转速搅拌溶胀10-17小时，再加入偶氮二异庚腈、甲苯、水和聚乙烯醇水溶液并在室温下，以440-900rpm转速搅拌溶胀反应1-4小时；最后向溶胀体系中加入模板分子、功能单体、分散液水和聚乙烯醇水溶液在室温下，以440-900rpm转速搅拌反应1-4小时，在40-70℃下，向体系通氮气于微球表面进行聚合聚合反应18-30小时，形成分子印迹键合染色的聚苯乙烯微球。

10.按权利要求9所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：所述微乳液按重量份数计，由1份染色的聚苯乙烯微球分散水液、1-3份邻苯二甲酸二丁基酯、0.1-0.17份十二烷基磺酸钠和50-70份蒸馏水混合制成，其中染色的聚苯乙烯微球分散水液浓度为0.1-0.4g/ml；

偶氮二异庚腈、甲苯、水和聚乙烯醇水溶液按重量份数计，0.1-0.4份偶氮二异庚腈、2-5份甲苯、10份聚乙烯醇水溶液和10-20份水混合；

向溶胀体系中加入模板分子、功能单体和分散液。按重量份数计，具体为0.1-0.4份模板分子、0.15-0.4份功能单体、2-4份分散液、10-15份去离子水和10质量份聚乙烯醇水溶液。

11.按权利要求10所述的高通量的环境污染物检测方法，其特征在于：所述分散液为乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)，功能单体为甲基丙烯酸；模板分子为测定的目标化合物。