[发明专利]一种快速检测灰霉病菌对杀菌剂敏感性的方法

权利要求书

1.一种快速测定杀菌剂对灰霉病菌孢子萌发抑制率以及对孢子萌发和菌丝生长综合抑制率的方法，其特征是，步骤如下：

1）将用PDE洗脱、过滤获得的孢子悬浮液加入到96孔板中，再加入经稀释过的药剂，获得相应的药剂质量浓度，并设置空白对照组；

2）用封口膜将96孔板密封严实，于酶标仪上测定OD值(对照0h吸光度值为OD₀，各处理0h吸光度值为OD₁)，于21℃黑暗条件下振荡（150r/min）培养，分别于24h、36h时再测定OD值，按照公式(1)计算药剂对分生孢子萌发的抑制率（24h时）及对孢子萌发和菌丝生长的综合抑制率（36h时），

2.一种快速测定杀菌剂对灰霉病菌菌丝生长抑制率的方法，其特征是，步骤如下：

1）将用PDE洗脱、过滤获得的孢子悬浮液加入到96孔板中，将其于21℃黑暗条件下振荡（150r/min）培养12h后，再加入经稀释过的药剂，获得相应的药剂质量浓度，设置空白对照组；

2）用封口膜将96孔板密封严实，于酶标仪上测定OD值(对照0h吸光度值为OD₂，各处理0h吸光度值为OD₃)，于21℃黑暗条件下振荡（150r/min）再培养，于12-24h后再测定OD值。按照公式（2）计算药剂对菌丝生长的抑制率，

3.根据权利要求1、2所述的快速测定方法，其特征是，步骤1）所述的PDE培养基，其配置方法为：马铃薯200g，煮好过滤后加入葡萄糖20g，加去离子水至1L，经灭菌后每升加入激动素0.01g，赤霉素0.05g，维生素B2 0.15g，FeCl₃ 0.15g，CaCl₂ 0.2g，链霉素（50μg/mL）且用1mol/L NaOH调节至pH值4.5。

4.根据权利要求1、2所述的快速测定方法，其特征是，步骤1）所述的所述孢子悬浮液孢子浓度为8×10⁵～1.6×10⁶个/mL，每孔加入的孢子悬浮液和药剂的量分别为180μL和20μL。

5.根据权利要求1、2所述的快速测定方法，其特征是，步骤2）所述酶标仪测定波长为630nm。

6.根据权利要求1所述的快速测定方法，其特征是，步骤2）所述测定时间分别为24h和36h。

7.根据权利要求2所述的快速测定方法，其特征是，步骤2）所述测定时间为12-24h。