[发明专利]一种靶向复合型纳米粒子的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于纳米药物载体领域，具体涉及一种靶向的脂质-高分子复合纳米粒子的制备工艺及其载羟基喜树碱靶向纳米粒子的研究。

背景技术

恶性肿瘤是目前对人类健康威胁最为严重的疾病，已成为人类死亡的第一原因。目前针对恶性肿瘤的治疗手段主要有手术治疗，化学治疗，放射治疗等，其中化学治疗是临床中除手术之外最为适用的治疗方法，应用非常普遍。而绝大部分化疗药物不仅会杀死肿瘤细胞，还会破坏正常组织与细胞，产生较为严重的副作用。因此，利用纳米粒子作为药物载体，是降低化疗药物毒副作用，提高药物疗效的最为有效的手段之一。

近几十年来，已研究开发了多种类型的药物载体，包括：脂质体、高分子纳米粒子、胶束、微囊微泡等，其中以脂质体和高分子纳米粒子为载体的抗癌药物制剂应用最广。脂质体作为药物载体具有良好的生物相容性，易在细胞表面吸附，融合，内吞，从而释放出药物；而高分子纳米粒子作为药物载体具有稳定性好、对疏水性药物包封率高等特点。但脂质体与高分子纳米粒子作为药物载体都具有各自的缺陷，例如，脂质体药物制剂对疏水性药物的载药量不高，且在体内循环过程中易发生药物渗漏，不能实现有效的缓控释；而高分子纳米粒子由于其疏水性表面在体内容易吸附调理素和脂蛋白等易被巨噬细胞识别并吞噬，从而被人体免疫系统清除，细胞膜融合性较脂质体差。这些都降低了该两类药物载体的化疗疗效。因此，近年来将脂质体和高分子纳米粒子相复合的新型的药物载体的概念已有涉及，通过制备脂质-高分子复合纳米粒子，不仅可以提高疏水性药物的包封率及载药量，还可以使微粒具有更好的生物相容性和体内循环性。

目前，制备复合型纳米粒子主要有两种方法。其一是模板法：先将高分子材料制备成纳米粒子，再将高分子纳米粒子与磷脂及聚乙二醇（PEG）化的磷脂共孵育，通过磷脂自组装的过程，在高分子纳米粒子上形成磷脂双分子壳层。此方法操作工艺复杂，复合纳米粒子与未包覆磷脂壳层的高分子纳米粒子不易分离收集，无法实现工业放大。而且由于制备过程中，需要较长的孵育时间及较高的孵育温度，药物易从中渗漏，造成载药量及包封率进一步下降；其二是纳米沉积法：将高分子聚合物溶解在易于水互溶的溶剂中，如：乙腈，丙酮等，将其滴加入含有磷脂的水溶液中并高速搅拌。专利CN 101708162A 公开了一种用上述方法，制备了一种由聚丙交酯-已交酯共聚物（PLGA），磷脂和PEG化的磷脂组成的核壳式纳米粒子。其粒径分布在80~250nm。该法制备核壳式纳米粒子同样具有一定的局限性。首先，制备过程中溶剂需要加热至65摄氏度，已高出了PLGA的玻璃化转变温度，其对载体材料的分子链会产生影响，如果用于载药纳米粒制备，有可能会对药物的稳定性、包封率产生影响；其次，如果要通过该法制备载药纳米颗粒，其只能针对可以溶解在乙腈中的药物，这大大限制了其实际使用范围，因为目前所发现的疗效较好的抗癌药大部分都是强疏水的，如：喜树碱，羟基喜树碱，阿霉素等，这些药物在乙腈等极性较大的溶剂中基本不溶；同时，使用该类与水可互溶的溶剂，药物也会随溶剂扩散至水相中，所得产物的载药量及包封率较低。因此，开发新的靶向复合型纳米粒子及其制备方法是非常有必要的，将会对靶向纳米药物制剂的开发及其应用产生巨大的推动作用。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种步骤简单易行，可工业化扩大生产的靶向复合型纳米粒子的制备方法。所得靶向复合型纳米粒子无需加热，对羟基喜树碱，多西他赛，阿霉素或紫杉醇等疏水性药物载药量及包封率高，磷脂表面覆盖率高，体外稳定性好且不易吸附血清蛋白，靶向性较好。

本发明将磷脂，聚乙二醇化磷脂以及连有RGD的聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺作为乳化剂，采用二氯甲烷和乙醇的二元混合溶剂体系，利用一步乳化法，制备以PLGA为核，磷脂及聚乙二醇化磷脂为壳层制备靶向复合型纳米粒子，具体包括如下步骤： 

（1）以二氯甲烷和乙醇为混合溶剂，二氯甲烷和乙醇的体积比为3~5:1；配制PLGA浓度为10~50mg/mL的有机溶液；

（2）根据步骤（1）中PLGA的质量，按质量比PLGA：磷脂=5~15:1，称取蛋黄卵磷脂与聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺，并溶于步骤1中配制好的PLGA有机溶液中，蛋黄卵磷脂与聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的摩尔比为9:1 ~ 3:7；

（3）将步骤（2）中配制的混合有机溶液按油水相体积比1: 2~5滴加入一定体积的超纯水中并高速涡旋振荡；

（4）通过超声波破碎仪，将步骤（3）中涡旋振荡后的乳液，进行探头超声，超声功率为7~14W，超声时间30-180秒；